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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。

我在试管中0.1mM IPTG, 室温(19℃),150rpm,诱导8h,大概30%在上清表达。

同样的条件,我在500mL锥形瓶摇100mL菌液,结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度,室温(19℃),60rpm,诱导8h,结果还是全在沉淀里表达!

请高人指导啊!!!!!
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

我这次又又优化了一次:
IPTG 0.02mM,0.1mM
转速:60,120rpm
体积:5mL,10mL
总共8组,可是这回没有一次上清有表达的。疯了。
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-03-01 17:52:51:
可溶性表达与否起决定作用的是序列本身,所以有时候你是无论如何也得不得的

但优化条件还是可以得到部分可溶性的

你的条件优化做的还不够,

另外60rpm不好

7楼2010-03-01 18:30:38
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查看全部 13 个回答

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-07 17:02
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达,我没有尝试过。
2楼2010-02-28 09:41:37
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

不过我看书上写培养体积越低,确实能增加可溶性表达比例。谢谢!
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-02-28 09:41:37:
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达,我没有尝试过。

3楼2010-02-28 12:10:59
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Charlie1331

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):说的没错,可是有什么建议没? 2010-03-07 17:02
怀疑在试管里培养时,由于体积小,溶氧差,菌体生长情况应该不好,此时诱导,不会大量表达产生目的蛋白;而在摇瓶中培养,溶氧等各方面都比试管强,菌体生长良好,具有较强的合成能力,而IPTG又是强诱导剂,估计用的也是T7启动子,强上加强,所以产生了包涵体。
4楼2010-02-28 22:09:10
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