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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 nicknelson 的 1 个金币
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。

我在试管中0.1mM IPTG, 室温（19℃），150rpm，诱导8h，大概30%在上清表达。

同样的条件，我在500mL锥形瓶摇100mL菌液，结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度，室温（19℃），60rpm，诱导8h，结果还是全在沉淀里表达！

请高人指导啊！！！！！
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1楼 2010-02-27 20:21:01
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):说的没错，可是有什么建议没？ 2010-03-07 17:02
怀疑在试管里培养时，由于体积小，溶氧差，菌体生长情况应该不好，此时诱导，不会大量表达产生目的蛋白；而在摇瓶中培养，溶氧等各方面都比试管强，菌体生长良好，具有较强的合成能力，而IPTG又是强诱导剂，估计用的也是T7启动子，强上加强，所以产生了包涵体。
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4楼2010-02-28 22:09:10
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-07 17:02
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达，我没有尝试过。
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2楼2010-02-28 09:41:37
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
不过我看书上写培养体积越低，确实能增加可溶性表达比例。谢谢！
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-02-28 09:41:37:
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达，我没有尝试过。

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3楼2010-02-28 12:10:59
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guoenwen

金虫 (小有名气)
同意三角瓶培养的时候溶氧不足的说法，我遇到过相似的问题。
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5楼2010-03-01 08:17:36
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