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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

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[交流] 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。

我在试管中0.1mM IPTG, 室温（19℃），150rpm，诱导8h，大概30%在上清表达。

同样的条件，我在500mL锥形瓶摇100mL菌液，结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度，室温（19℃），60rpm，诱导8h，结果还是全在沉淀里表达！

请高人指导啊！！！！！

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1楼 2010-02-27 20:21:01

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Charlie1331

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引用回帖:

Originally posted by Charlie1331 at 2010-02-28 22:09:10:
怀疑在试管里培养时，由于体积小，溶氧差，菌体生长情况应该不好，此时诱导，不会大量表达产生目的蛋白；而在摇瓶中培养，溶氧等各方面都比试管强，菌体生长良好，具有较强的合成能力，而IPTG又是强诱导剂，估计用 ...

首先呢，根据经验，可以试一下不诱导的情况。由于T7有着较强的本底表达，所以，不诱导，也会有蛋白合成；如果不成，那么就可以查阅一些关于增加膜透性的文章。包涵体形成的原因就有膜向外转运蛋白的能力与其合成能力不相匹配，可适量添加一些表面活性剂处理。