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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-08 09:48
引用回帖:
Originally posted by nicknelson at 2010-02-27 20:21:01:
我在试管中0.1mM IPTG, 室温(19℃),150rpm,诱导8h,大概30%在上清表达。

同样的条件,我在500mL锥形瓶摇100mL菌液,结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度,室温(19℃),6 ...

一般来说,当菌体生长起来后,你试管中的溶氧浓度是0. 其Kla近似是0.

而摇瓶中(20-50ml/250ml)的 KLa大约为 60-10, 供氧能力比试管强很多倍!

所以,要想模仿试管,你需要在250ml摇瓶中装入大约150ml-200ml的培养基。

你可以做个装量梯度实验:25、50、100、150、200mL,不看菌体能长多浓,就看上清可溶性蛋白比例。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2010-03-08 09:18:00
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

我后来在500mL三角瓶里摇200mL,也没看到上清有表达,我想试试直接纯化,看看是不是有少量的目的蛋白。
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2010-03-08 09:18:00:


一般来说,当菌体生长起来后,你试管中的溶氧浓度是0. 其Kla近似是0.

而摇瓶中(20-50ml/250ml)的 KLa大约为 60-10, 供氧能力比试管强很多倍!

所以,要想模仿试管,你需要在250ml摇瓶中装入大约150ml ...

12楼2010-03-08 09:49:23
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dy_414

木虫 (正式写手)

直接纯化复性太浪费精力,既然LZ做出来过上清表达,不如多试一试。

还有就是IPTG的浓度问题,如果降一下浓度会不会好呢?
我坚信,rp是攒出来的
13楼2010-03-08 12:56:00
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