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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-08 09:48
引用回帖:
Originally posted by nicknelson at 2010-02-27 20:21:01:
我在试管中0.1mM IPTG, 室温（19℃），150rpm，诱导8h，大概30%在上清表达。

同样的条件，我在500mL锥形瓶摇100mL菌液，结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度，室温（19℃），6 ...

一般来说，当菌体生长起来后，你试管中的溶氧浓度是0. 其Kla近似是0.

而摇瓶中（20-50ml/250ml)的 KLa大约为 60-10， 供氧能力比试管强很多倍！

所以，要想模仿试管，你需要在250ml摇瓶中装入大约150ml-200ml的培养基。

你可以做个装量梯度实验：25、50、100、150、200mL，不看菌体能长多浓，就看上清可溶性蛋白比例。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2010-03-08 09:18:00
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
我后来在500mL三角瓶里摇200mL，也没看到上清有表达，我想试试直接纯化，看看是不是有少量的目的蛋白。
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2010-03-08 09:18:00:


一般来说，当菌体生长起来后，你试管中的溶氧浓度是0. 其Kla近似是0.

而摇瓶中（20-50ml/250ml)的 KLa大约为 60-10， 供氧能力比试管强很多倍！

所以，要想模仿试管，你需要在250ml摇瓶中装入大约150ml ...

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12楼2010-03-08 09:49:23
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dy_414

木虫 (正式写手)
直接纯化复性太浪费精力，既然LZ做出来过上清表达，不如多试一试。

还有就是IPTG的浓度问题，如果降一下浓度会不会好呢？
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我坚信，rp是攒出来的
13楼2010-03-08 12:56:00
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