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slee83

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白的冰冻切片 已有2人参与

大家好,本人最近在做表达荧光蛋白的组织的冰冻切片。根据一个文献上的方法,就是组织取材之后,用含4%的福尔马林、7%饱和苦味酸和10%蔗糖的固定液固定,然后用冷冻切片包埋剂包埋在液氮上冻结,冰冻切片。之后观察,发现实验组(注射了含有绿色荧光蛋白基因的质粒)和空白组都是一样都有绿色的荧光,载玻片上,只要有组织的地方,都能看到绿色的荧光。按道理来说,应该只有实验组才能观察到荧光的,所以,现在都不知道是为什么导致这样的结果。

请问有没有谁做过这方面的实验的?能告诉我具体是怎么做的吗?如是否固定了?若固定了,用什么做为固定,固定的程序是怎样的?切片后,荧光观察之前,还需要怎样处理吗?谢谢!
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celeryliu

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你这个绿色的光应该是背景光吧
引用回帖:
Originally posted by slee83 at 2010-01-11 22:39:36:
大家好,本人最近在做表达荧光蛋白的组织的冰冻切片。根据一个文献上的方法,就是组织取材之后,用含4%的福尔马林、7%饱和苦味酸和10%蔗糖的固定液固定,然后用冷冻切片包埋剂包埋在液氮上冻结,冰冻切片。之后观 ...

2楼2011-02-18 09:32:18
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thq210

木虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我最近也在做类似的切片,由于组织拍完荧光照片后还要用于原位杂交,所以直接是将组织PFA固定后,放入0.5M用PBS配置的蔗糖,等组织沉淀后 再用OCT包埋。切片后在拍照也能看到荧光。
建议一张片子上最好有对照组织,那样在拍照的时候,调节曝光度的时候有一个对照。
3楼2011-04-03 17:12:53
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