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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白的冰冻切片
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slee83

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白的冰冻切片 已有2人参与

大家好，本人最近在做表达荧光蛋白的组织的冰冻切片。根据一个文献上的方法，就是组织取材之后，用含4%的福尔马林、7%饱和苦味酸和10%蔗糖的固定液固定，然后用冷冻切片包埋剂包埋在液氮上冻结，冰冻切片。之后观察，发现实验组（注射了含有绿色荧光蛋白基因的质粒）和空白组都是一样都有绿色的荧光，载玻片上，只要有组织的地方，都能看到绿色的荧光。按道理来说，应该只有实验组才能观察到荧光的，所以，现在都不知道是为什么导致这样的结果。

请问有没有谁做过这方面的实验的？能告诉我具体是怎么做的吗？如是否固定了？若固定了，用什么做为固定，固定的程序是怎样的？切片后，荧光观察之前，还需要怎样处理吗？谢谢！
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1楼 2010-01-11 22:39:36
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celeryliu

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这个绿色的光应该是背景光吧
引用回帖:
Originally posted by slee83 at 2010-01-11 22:39:36:
大家好，本人最近在做表达荧光蛋白的组织的冰冻切片。根据一个文献上的方法，就是组织取材之后，用含4%的福尔马林、7%饱和苦味酸和10%蔗糖的固定液固定，然后用冷冻切片包埋剂包埋在液氮上冻结，冰冻切片。之后观 ...

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2楼2011-02-18 09:32:18
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thq210

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也在做类似的切片，由于组织拍完荧光照片后还要用于原位杂交，所以直接是将组织PFA固定后，放入0.5M用PBS配置的蔗糖，等组织沉淀后 再用OCT包埋。切片后在拍照也能看到荧光。
建议一张片子上最好有对照组织，那样在拍照的时候，调节曝光度的时候有一个对照。
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3楼2011-04-03 17:12:53
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