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scauchjy

金虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】帮忙分析下western结果 已有3人参与

各位战友,我做的是香蕉果实一个转录因子的western,大小26 kDa左右,上样30 ug,我们做过考染,条带比较清晰,抗体是委托公司通过原核表达,蛋白纯化和兔血清纯化得来的,二抗是promega的羊抗兔带AP标记。我们的转膜条件是100 毫安转6 h,封闭液是3%BSA+TBST,4度封闭过夜,一抗浓度1:2000,反应3 h,二抗使用浓度1:5000,反应1 h。NBT和BCIP显色。我这个图片显色时间较长。得到的结果是条带多,目的条带为图片箭头所示。请大家帮忙分析下是啥原因,是不是封闭不好还是一抗使用浓度高了?多谢了!
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

这个看图还要流量,不厚道??
5楼2010-07-16 17:44:15
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liudaihualyh

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的杂带比目的带清楚多了,建议你一抗洗脱的时间延长,你是用的多长时间?WB我觉得有一句话很重要:“慢工出细活”,欲速则不达,我每次不急不慢做的总是最好的,但敢时间做的总有遗憾,还有就是你最好在实验室搞个固定的流程,温度和湿度,这样把每次的试验条件都固定,千万不要轻易改动,这样对于你以后结果的重复性非常重要。
3楼2010-01-01 11:27:40
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wd1987year

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看个图还要给钱……555555555
我是谁?
4楼2010-07-16 17:41:38
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快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我感觉你的一抗时间有点长,我们都是一个小时,还有杂带也有可能是与二抗的非特异性反应
其实越简单的生活越幸福
6楼2012-04-10 20:26:53
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