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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】帮忙分析下western结果
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scauchjy

金虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】帮忙分析下western结果 已有3人参与

各位战友，我做的是香蕉果实一个转录因子的western，大小26 kDa左右，上样30 ug，我们做过考染，条带比较清晰，抗体是委托公司通过原核表达，蛋白纯化和兔血清纯化得来的，二抗是promega的羊抗兔带AP标记。我们的转膜条件是100 毫安转6 h，封闭液是3%BSA+TBST，4度封闭过夜，一抗浓度1：2000，反应3 h，二抗使用浓度1：5000，反应1 h。NBT和BCIP显色。我这个图片显色时间较长。得到的结果是条带多，目的条带为图片箭头所示。请大家帮忙分析下是啥原因，是不是封闭不好还是一抗使用浓度高了？多谢了！
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1楼 2009-12-31 19:37:33
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快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我感觉你的一抗时间有点长，我们都是一个小时，还有杂带也有可能是与二抗的非特异性反应
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其实越简单的生活越幸福
6楼2012-04-10 20:26:53
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liudaihualyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的杂带比目的带清楚多了，建议你一抗洗脱的时间延长，你是用的多长时间？WB我觉得有一句话很重要：“慢工出细活”，欲速则不达，我每次不急不慢做的总是最好的，但敢时间做的总有遗憾，还有就是你最好在实验室搞个固定的流程，温度和湿度，这样把每次的试验条件都固定，千万不要轻易改动，这样对于你以后结果的重复性非常重要。
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3楼2010-01-01 11:27:40
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wd1987year

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看个图还要给钱……555555555
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我是谁？
4楼2010-07-16 17:41:38
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
这个看图还要流量，不厚道？？
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5楼2010-07-16 17:44:15
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