应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】增加引物量有作用吗？
141/2返回列表12下一页
查看: 1237  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】增加引物量有作用吗？

PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一下。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-18 05:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlzkchong

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-18 12:47
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
引用回帖:
Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-18 05:17:
PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一 ...

不知道你的模板是什么？如果是质粒DNA的话，可以转化大肠杆菌，长出单菌落后挑斑摇菌，提质粒。增加引物量是没什么用的，扩增不到目的片段，估计只能是模板中所含你的目的片段量很少，你可以回收已经扩增出来的目的条带，用回收产物再做PCR
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-12-18 09:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiyiglad

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):是个好办法 12-18 12:48
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
循环数加大，然后将扩增产物回收，进行二次扩增
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-12-18 10:05:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 12-18 12:48
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
引物增加基本没什么用的。，引物的设计很重要
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2009-12-18 10:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
关键是没有条带啊，一点都没有
赞一下 回复此楼
5楼2009-12-18 15:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apple-z

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR体系中每样东西的浓度都是有一定要求的，不能随便的增大或减少。
引物在反应体系中的终浓度一般为0.1~0.5uM
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-12-18 16:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我提供一种方法给你


如下

米可以做巢式PCR，或者半巢式PCR，具体的话，这个技术很成熟了，你查阅下，据你所说的，我估计是本身含量就很低。

另：我仍然认为引物设计的问题是首要需要分析的，其次是你的模板的浓度，如果两者都没问题，可以考虑下我上面的建议。

祝你实验顺利
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-12-18 16:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanlili

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火，延伸的温度没问题吗？考虑一下
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-12-18 18:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meigaofu

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
9楼2009-12-18 18:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
引物的量影响不是很大，如果你只是普通PCR的话。提高效率首先要考察模板的质量，其次是扩增的体系，还有就是PCR程序了。
赞一下 回复此楼
10楼2009-12-18 21:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境学硕288求调剂 +6 皮皮皮123456 2026-03-22 6/300 2026-03-22 16:52 by i_cooler
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭