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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】增加引物量有作用吗？

PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一下。

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1楼 2009-12-18 05:17:21

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hyde0706

木虫 (正式写手)

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引物的量影响不是很大，如果你只是普通PCR的话。提高效率首先要考察模板的质量，其次是扩增的体系，还有就是PCR程序了。

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10楼2009-12-18 21:38:19

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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-18 12:47
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44

引用回帖:

Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-18 05:17:
PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一 ...

不知道你的模板是什么？如果是质粒DNA的话，可以转化大肠杆菌，长出单菌落后挑斑摇菌，提质粒。增加引物量是没什么用的，扩增不到目的片段，估计只能是模板中所含你的目的片段量很少，你可以回收已经扩增出来的目的条带，用回收产物再做PCR

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2楼2009-12-18 09:44:19

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