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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

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[交流] 做电转感受态时有染菌的吗已有8人参与

做了一个多月的电转了，丝毫没有一点结果，每次抗性平板上都会长出一些杂菌，空白对照也有杂菌，而且长的速度非常快，涂板不到4 h就能看到菌落，12-24 h基本长满平板，所以就算有阳性克隆子长出来，也被掩盖了，因为那种菌镜检和我的菌很像，根本不好区分。涂双层抗性平板也能生长，现在在找原因，可能的原因有以下几点：
1）感受态细胞在培养过程中染菌，这个已经通过不同抗性的液体培养基同时培养，排除在外了，因为在含抗性的液体培养基中，没有菌生长
2）感受态在制备过程中染菌，这个除离心不在无菌室外，其他步骤都在无菌室完成，离心机没有经过消毒灭菌，不知道这个染菌可能性有多大
3）电转杯没有清洗干净，电转杯在用之前是泡在75%酒精里的，然后用无菌水冲洗几次，放100%乙醇30 min以上，然后在无菌室里吹干（紫外灯开着）
4）电转过程中染菌，以前电转都没有在无菌室操作，后来把电转仪也搬到无菌室了，仍然有染菌现象；
4）制作感受态的无菌水和10%甘油也重新配了，还是染菌。
5）复苏培养2 h的过程是在摇床进行的，1.5 ml的离心管，用封口膜封住，这样会不会染菌？
能想到的原因就这么多，不知道还有其他的不？有没有类似经历的战友们，是如何对抗染菌这个棘手的问题的？

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