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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因组DNA做PCR时，最下面很亮的带是什么啊
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w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 基因组DNA做PCR时，最下面很亮的带是什么啊

把目的基因转到真核生物中表达，提基因组DNA，先做个了PCR，看是否整合到基因组中，不知道为什么会出现那么多杂带？最底下那条很亮的带是什么呢？我设计的引物没有二聚体啊


见图，从左至右依次为Marker，不同浓度模板六个泳道，以质粒做模板P的阳性对照，无模板的阴性对照

补充一下，我提的基因组DNA应该是没有问题的，OD260/OD280为1.81，电泳结果显示也是很亮的单条带

[ Last edited by w.king124 on 2009-10-16 at 16:45 ]
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1楼 2009-10-16 16:34:18
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luckyan110

★
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低于100bp都是引物二聚体 挺常见的
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12楼2009-10-17 10:43:33
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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不是引物二聚体就是RNA，RNA没有处理干净，我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物，建议你加DMSO跑，提高退火温度
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-10-16 16:38:15
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-16 16:38:
不是引物二聚体就是RNA，RNA没有处理干净，我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物，建议你加DMSO跑，提高退火温度

应该可以排除二聚体和RNA的可能
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3楼2009-10-16 16:51:30
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delia1013

木虫 (著名写手)
★
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就是引物二聚体啊，我拿酵母cDNA批的时候也这样，目的条带比较淡，下面最亮的就是引物聚合了，不用管啦~~切你的带就可以啦~~
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4楼2009-10-16 16:57:18
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heismeng

金虫 (小有名气)
dimer
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5楼2009-10-16 18:16:16
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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最下面的肯定是引物二聚体，基因组DNA怎么会是单条带呢？
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6楼2009-10-16 23:06:15
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caoliang38

铁虫 (小有名气)
★
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你的条带太亮了吧 EB加多少啊
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7楼2009-10-16 23:19:30
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695

木虫 (职业作家)
引物二聚体
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8楼2009-10-17 00:50:20
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xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
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是引物二聚体的，因为随后一个阴性很亮~~ 不是软件设计没有二聚体就一定不会有的
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9楼2009-10-17 01:08:21
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★
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marker 最后一个条带是多大？
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10楼2009-10-17 07:10:02
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