24小时热门版块排行榜    

查看: 1548  |  回复: 20
当前主题已经存档。

w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 基因组DNA做PCR时,最下面很亮的带是什么啊

把目的基因转到真核生物中表达,提基因组DNA,先做个了PCR,看是否整合到基因组中,不知道为什么会出现那么多杂带?最底下那条很亮的带是什么呢?我设计的引物没有二聚体啊


见图,从左至右依次为Marker,不同浓度模板六个泳道,以质粒做模板P的阳性对照,无模板的阴性对照

补充一下,我提的基因组DNA应该是没有问题的,OD260/OD280为1.81,电泳结果显示也是很亮的单条带

[ Last edited by w.king124 on 2009-10-16 at 16:45 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

luckyan110


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
低于100bp都是引物二聚体 挺常见的
12楼2009-10-17 10:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-10-16 16:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-16 16:38:
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度

应该可以排除二聚体和RNA的可能
3楼2009-10-16 16:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

delia1013

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
就是引物二聚体啊,我拿酵母cDNA批的时候也这样,目的条带比较淡,下面最亮的就是引物聚合了,不用管啦~~切你的带就可以啦~~
4楼2009-10-16 16:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)

5楼2009-10-16 18:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最下面的肯定是引物二聚体,基因组DNA怎么会是单条带呢?
6楼2009-10-16 23:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoliang38

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的条带太亮了吧 EB加多少啊
7楼2009-10-16 23:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

引物二聚体
8楼2009-10-17 00:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是引物二聚体的,因为随后一个阴性很亮~~ 不是软件设计没有二聚体就一定不会有的
9楼2009-10-17 01:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fykxy_206

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
marker 最后一个条带是多大?
10楼2009-10-17 07:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 w.king124 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大家玩filecode,现在的申请与受理打不开了 +3 dcqxinyang 2026-08-14 6/300 2026-08-14 18:03 by 690092147
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +21 医学老男孩 2026-08-13 47/2350 2026-08-14 17:26 by gdd2018
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +5 Tide man 2026-08-14 6/300 2026-08-14 17:26 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
信息提示
请填处理意见