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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因组DNA做PCR时，最下面很亮的带是什么啊
汕头大学海洋科学接受调剂
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stickfrom

金虫 (小有名气)
对啊，你用的maker几啊？我觉得可能是引物二聚体。
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11楼2009-10-17 08:58:43
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luckyan110

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
低于100bp都是引物二聚体 挺常见的
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12楼2009-10-17 10:43:33
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sihuanchen

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提高退火温度为什么可以避免引物二聚体产生呢？
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13楼2009-10-17 11:05:01
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rava

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
相当常见，dimer或hairpin等二级结构的引物容易产生这种条带，软件设计没有dimer、crossdimer等只是表明这对引物有利于扩出目标条带。不需要管，提高退火温度照样有。非特异性带跟引物设计和PCR条件都有关，先调条件再改引物吧，你引物浓度太高或者循环数过多必居其一。
带亮得刺眼是提高对比度的结果。
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14楼2009-10-17 11:06:29
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-16 23:06:
最下面的肯定是引物二聚体，基因组DNA怎么会是单条带呢？

确实是单条带啊，当时不过是为了看看有没有拖尾的，就没保存
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15楼2009-10-17 13:10:36
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rava at 2009-10-17 11:06:
相当常见，dimer或hairpin等二级结构的引物容易产生这种条带，软件设计没有dimer、crossdimer等只是表明这对引物有利于扩出目标条带。不需要管，提高退火温度照样有。非特异性带跟引物设计和PCR条件都有关，先调条 ...

引物在体系中的浓度是1uM，可能有点高把
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16楼2009-10-17 13:23:23
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by stickfrom at 2009-10-17 08:58:
对啊，你用的maker几啊？我觉得可能是引物二聚体。

DL2000的Marker，最下面的是100bp
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17楼2009-10-17 13:25:41
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huzhihong-

新虫 (小有名气)

pcr最后一步72度10分钟目的是什么？？？

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一直不明白这个原因，请教一下
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18楼2009-10-17 21:40:09
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jjlbest

木虫 (著名写手)
是引物二聚体，因为你最后的那个泳道没有模板也出现该条带，说明是引物二聚体。
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19楼2009-10-17 21:45:22
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fungi1205

金虫 (正式写手)
引物二聚体~~~~~~~~~~
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加油，发挥人生最大的热量温暖身边的人
20楼2009-10-18 01:19:59
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