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stickfrom

金虫 (小有名气)

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对啊，你用的maker几啊？我觉得可能是引物二聚体。

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11楼2009-10-17 08:58:43

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luckyan110

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低于100bp都是引物二聚体挺常见的

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12楼2009-10-17 10:43:33

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sihuanchen

新虫 (小有名气)

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提高退火温度为什么可以避免引物二聚体产生呢？

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13楼2009-10-17 11:05:01

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rava

金虫 (小有名气)

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相当常见，dimer或hairpin等二级结构的引物容易产生这种条带，软件设计没有dimer、crossdimer等只是表明这对引物有利于扩出目标条带。不需要管，提高退火温度照样有。非特异性带跟引物设计和PCR条件都有关，先调条件再改引物吧，你引物浓度太高或者循环数过多必居其一。
带亮得刺眼是提高对比度的结果。

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14楼2009-10-17 11:06:29

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w.king124

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-16 23:06:
最下面的肯定是引物二聚体，基因组DNA怎么会是单条带呢？

确实是单条带啊，当时不过是为了看看有没有拖尾的，就没保存

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15楼2009-10-17 13:10:36

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w.king124

金虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

引用回帖:

Originally posted by rava at 2009-10-17 11:06:
相当常见，dimer或hairpin等二级结构的引物容易产生这种条带，软件设计没有dimer、crossdimer等只是表明这对引物有利于扩出目标条带。不需要管，提高退火温度照样有。非特异性带跟引物设计和PCR条件都有关，先调条 ...

引物在体系中的浓度是1uM，可能有点高把

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16楼2009-10-17 13:23:23

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