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w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 基因组DNA做PCR时,最下面很亮的带是什么啊

把目的基因转到真核生物中表达,提基因组DNA,先做个了PCR,看是否整合到基因组中,不知道为什么会出现那么多杂带?最底下那条很亮的带是什么呢?我设计的引物没有二聚体啊


见图,从左至右依次为Marker,不同浓度模板六个泳道,以质粒做模板P的阳性对照,无模板的阴性对照

补充一下,我提的基因组DNA应该是没有问题的,OD260/OD280为1.81,电泳结果显示也是很亮的单条带

[ Last edited by w.king124 on 2009-10-16 at 16:45 ]
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fykxy_206

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
marker 最后一个条带是多大?
10楼2009-10-17 07:10:02
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-10-16 16:38:15
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-16 16:38:
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度

应该可以排除二聚体和RNA的可能
3楼2009-10-16 16:51:30
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delia1013

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
就是引物二聚体啊,我拿酵母cDNA批的时候也这样,目的条带比较淡,下面最亮的就是引物聚合了,不用管啦~~切你的带就可以啦~~
4楼2009-10-16 16:57:18
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