24小时热门版块排行榜    

查看: 1328  |  回复: 20
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 基因组DNA做PCR时,最下面很亮的带是什么啊

把目的基因转到真核生物中表达,提基因组DNA,先做个了PCR,看是否整合到基因组中,不知道为什么会出现那么多杂带?最底下那条很亮的带是什么呢?我设计的引物没有二聚体啊


见图,从左至右依次为Marker,不同浓度模板六个泳道,以质粒做模板P的阳性对照,无模板的阴性对照

补充一下,我提的基因组DNA应该是没有问题的,OD260/OD280为1.81,电泳结果显示也是很亮的单条带

[ Last edited by w.king124 on 2009-10-16 at 16:45 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是引物二聚体的,因为随后一个阴性很亮~~ 不是软件设计没有二聚体就一定不会有的
9楼2009-10-17 01:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2009-10-16 16:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-16 16:38:
不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,我也经常用genomic DNA跑PCR鉴定转基因植物,建议你加DMSO跑,提高退火温度

应该可以排除二聚体和RNA的可能
3楼2009-10-16 16:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

delia1013

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
就是引物二聚体啊,我拿酵母cDNA批的时候也这样,目的条带比较淡,下面最亮的就是引物聚合了,不用管啦~~切你的带就可以啦~~
4楼2009-10-16 16:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 生物学学硕求调剂 +4 小羊睡着了? 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:42 by hyzs6688
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
请填处理意见