| 查看: 780 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者LUCINA*将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
请教关于转染的若干问题
|
||
|
我最近在进行转染，用的是QIAGEN品牌的Attractene转染试剂，体系按照说明书配置的，转染六孔板，结果在WB后发现检不出标签。这个基因是之前师兄探索过的一个基因，表达应该是没有问题的。用了了Abways和Abclonal的一抗都不行。也转过GFP标签显微镜下荧光很低，就是没转进去。后来换了碧云天的lipo6000转染试剂和CST抗体就可以检出来。但是我师兄说他之前用的是Abways的抗体，我现在用这个品牌抗体孵不出就是有问题，怀疑我检出来的就不是那个基因。 而且最近我用CST抗体孵育发现空载也有带（大哭！） 有懂转染的同学解答一下吗（球球） 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有51人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
|
首先就要排除你是否转进去了，正常你需要对照，就像你的GFP理论上是同一个载体，只有这个蛋白这个区域不同。另外WB需要内参，那样起码能够证明WB整个流程什么的没有问题，同时包括提蛋白的过程。另外你说荧光很低，那就侧面说明表达量不高。但是理论上只要有表达，WB也能检测出来。如果没有目的带，检查一抗，或者提高一抗比例，然后就是显影的时候调长时间，跑胶的时候尽量多上点样。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-11-03 00:16:25
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
|
但是我感觉主要问题出在你的转染上面了，我们用的thermo的lipo两千 之前也用过国产的 转质粒基本都表达量很高，没有出现你上述情况过。CST的抗体确实比其他的好点，我们也用过这个牌子。但是空载也有带的话，那你这完全不能说明什么了。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2023-11-03 00:18:38
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2023-11-03 00:20:39
5楼2023-11-15 20:09:32