| 查看: 882 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者LUCINA*将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
请教关于转染的若干问题
|
||
|
我最近在进行转染，用的是QIAGEN品牌的Attractene转染试剂，体系按照说明书配置的，转染六孔板，结果在WB后发现检不出标签。这个基因是之前师兄探索过的一个基因，表达应该是没有问题的。用了了Abways和Abclonal的一抗都不行。也转过GFP标签显微镜下荧光很低，就是没转进去。后来换了碧云天的lipo6000转染试剂和CST抗体就可以检出来。但是我师兄说他之前用的是Abways的抗体，我现在用这个品牌抗体孵不出就是有问题，怀疑我检出来的就不是那个基因。 而且最近我用CST抗体孵育发现空载也有带（大哭！） 有懂转染的同学解答一下吗（球球） 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
|
首先就要排除你是否转进去了，正常你需要对照，就像你的GFP理论上是同一个载体，只有这个蛋白这个区域不同。另外WB需要内参，那样起码能够证明WB整个流程什么的没有问题，同时包括提蛋白的过程。另外你说荧光很低，那就侧面说明表达量不高。但是理论上只要有表达，WB也能检测出来。如果没有目的带，检查一抗，或者提高一抗比例，然后就是显影的时候调长时间，跑胶的时候尽量多上点样。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-11-03 00:16:25
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
|
但是我感觉主要问题出在你的转染上面了，我们用的thermo的lipo两千 之前也用过国产的 转质粒基本都表达量很高，没有出现你上述情况过。CST的抗体确实比其他的好点，我们也用过这个牌子。但是空载也有带的话，那你这完全不能说明什么了。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2023-11-03 00:18:38
Glenice Y
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1547.7
- 散金: 50
- 沙发: 4
- 帖子: 555
- 在线: 72.1小时
- 虫号: 25353622
- 注册: 2021-02-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2023-11-03 00:20:39
5楼2023-11-15 20:09:32
