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请教关于转染的若干问题
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我最近在进行转染，用的是QIAGEN品牌的Attractene转染试剂，体系按照说明书配置的，转染六孔板，结果在WB后发现检不出标签。这个基因是之前师兄探索过的一个基因，表达应该是没有问题的。用了了Abways和Abclonal的一抗都不行。也转过GFP标签显微镜下荧光很低，就是没转进去。后来换了碧云天的lipo6000转染试剂和CST抗体就可以检出来。但是我师兄说他之前用的是Abways的抗体，我现在用这个品牌抗体孵不出就是有问题，怀疑我检出来的就不是那个基因。 而且最近我用CST抗体孵育发现空载也有带（大哭！） 有懂转染的同学解答一下吗（球球） 发自小木虫Android客户端 |
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Glenice Y
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但是我感觉主要问题出在你的转染上面了，我们用的thermo的lipo两千 之前也用过国产的 转质粒基本都表达量很高，没有出现你上述情况过。CST的抗体确实比其他的好点，我们也用过这个牌子。但是空载也有带的话，那你这完全不能说明什么了。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2023-11-03 00:18:38
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首先就要排除你是否转进去了，正常你需要对照，就像你的GFP理论上是同一个载体，只有这个蛋白这个区域不同。另外WB需要内参，那样起码能够证明WB整个流程什么的没有问题，同时包括提蛋白的过程。另外你说荧光很低，那就侧面说明表达量不高。但是理论上只要有表达，WB也能检测出来。如果没有目的带，检查一抗，或者提高一抗比例，然后就是显影的时候调长时间，跑胶的时候尽量多上点样。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-11-03 00:16:25
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