应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 遇到大难题~~~
241/3返回列表123下一页
查看: 853  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 遇到大难题~~~

本人现在从基因组上P一个基因，最初摸索的退火温度为58度，后来做大PCR体系，回收连T载体，筛选菌落做菌落PCR,同时还做了单引物验证，电泳结果显示：只添加了下游引物的PCR跟添加了上下游引物的PCR结果一样，均得到了一样大小的目的片段。。。
    于是老师让我继续优化PCR体系与条件，昨天做了个梯度PCR，做了5个梯度，退火温度分别为55、56、57、58、59，电泳后结果发现55、56有条带，而57~59均没有。。。。。现在都不知道怎么做，还有，我的PCR结果非特异性条带很多。。。。  
附上图片以说明问题，等待高手的指引。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-29 09:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
对图说明下：这个是梯度PCR的结果，从右至左分别为：MARKER，退火温度为55度的PCR结果，56度的PCR结果，57度的PCR结果，58度的PCR结果，59度的PCR结果
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-29 09:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
MARKER从下至上分别为300bp、500bp、800bp、1000bp、1500bp、2000bp、3000bp、5000bp，我的目的条带为2000bp左右。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-29 09:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanshi

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 9-30 12:46
非特异性条带多可以考虑降落式PCR，不过你的退火温度较高后没有目的条带，所以估计也不行。。

建议：重新设计引物。。

[ Last edited by huanshi on 2009-9-29 at 09:42 ]
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2009-09-29 09:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
回收目的片段大小区域附近的条带，做巢市PCR
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-29 10:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pcr特异性这么差，不知道你模板基因组DNA的完整性怎么样？模板的用量如何？
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
6楼2009-09-29 13:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlwhappy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要扩出2000bp那条带，建议你再稍微降低点退火温度，并在体系中加入少量DMSO！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-09-29 14:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-9-29 13:58:
pcr特异性这么差，不知道你模板基因组DNA的完整性怎么样？模板的用量如何？

我提取的基因组如图，模板是稀释了10倍的DNA。。。。
赞一下 回复此楼
8楼2009-09-29 16:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物一定要重新设计……
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-09-29 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-9-29 16:27:
引物一定要重新设计……

这样啊，可是我设计这个引物的时候都已经找的最优的了。。。。我是从基因组上P目的基因的5'端作为同源重组的一个同源臂~~~~~~~~~~
赞一下 回复此楼
10楼2009-09-29 16:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨后郁金香 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 材料调剂 +5 匹克i 2026-03-23 5/250 2026-03-24 08:50 by dick_runner
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭