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遇到大难题~~~
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本人现在从基因组上P一个基因，最初摸索的退火温度为58度，后来做大PCR体系，回收连T载体，筛选菌落做菌落PCR,同时还做了单引物验证，电泳结果显示：只添加了下游引物的PCR跟添加了上下游引物的PCR结果一样，均得到了一样大小的目的片段。。。 于是老师让我继续优化PCR体系与条件，昨天做了个梯度PCR，做了5个梯度，退火温度分别为55、56、57、58、59，电泳后结果发现55、56有条带，而57~59均没有。。。。。现在都不知道怎么做，还有，我的PCR结果非特异性条带很多。。。。 附上图片以说明问题，等待高手的指引。。。。 |
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