应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 遇到大难题~~~
汕头大学海洋科学接受调剂
241/3返回列表123下一页
查看: 892  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 遇到大难题~~~

本人现在从基因组上P一个基因，最初摸索的退火温度为58度，后来做大PCR体系，回收连T载体，筛选菌落做菌落PCR,同时还做了单引物验证，电泳结果显示：只添加了下游引物的PCR跟添加了上下游引物的PCR结果一样，均得到了一样大小的目的片段。。。
    于是老师让我继续优化PCR体系与条件，昨天做了个梯度PCR，做了5个梯度，退火温度分别为55、56、57、58、59，电泳后结果发现55、56有条带，而57~59均没有。。。。。现在都不知道怎么做，还有，我的PCR结果非特异性条带很多。。。。  
附上图片以说明问题，等待高手的指引。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-29 09:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
对图说明下：这个是梯度PCR的结果，从右至左分别为：MARKER，退火温度为55度的PCR结果，56度的PCR结果，57度的PCR结果，58度的PCR结果，59度的PCR结果
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-29 09:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
MARKER从下至上分别为300bp、500bp、800bp、1000bp、1500bp、2000bp、3000bp、5000bp，我的目的条带为2000bp左右。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-29 09:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanshi

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 9-30 12:46
非特异性条带多可以考虑降落式PCR，不过你的退火温度较高后没有目的条带，所以估计也不行。。

建议：重新设计引物。。

[ Last edited by huanshi on 2009-9-29 at 09:42 ]
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2009-09-29 09:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
回收目的片段大小区域附近的条带，做巢市PCR
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-29 10:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pcr特异性这么差，不知道你模板基因组DNA的完整性怎么样？模板的用量如何？
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
6楼2009-09-29 13:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlwhappy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要扩出2000bp那条带，建议你再稍微降低点退火温度，并在体系中加入少量DMSO！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-09-29 14:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-9-29 13:58:
pcr特异性这么差，不知道你模板基因组DNA的完整性怎么样？模板的用量如何？

我提取的基因组如图，模板是稀释了10倍的DNA。。。。
赞一下 回复此楼
8楼2009-09-29 16:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物一定要重新设计……
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-09-29 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-9-29 16:27:
引物一定要重新设计……

这样啊，可是我设计这个引物的时候都已经找的最优的了。。。。我是从基因组上P目的基因的5'端作为同源重组的一个同源臂~~~~~~~~~~
赞一下 回复此楼
10楼2009-09-29 16:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨后郁金香 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +5 路六六jjj 2026-04-13 5/250 2026-04-13 15:26 by 张zhihao
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线，领导幸灾乐祸，教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 347求调剂 +4 mhyqyy 2026-04-06 4/200 2026-04-12 02:27 by 秋豆菜芽
[考研] 求调剂 +18 MAX怅惘 2026-04-09 20/1000 2026-04-11 23:31 by zhen～
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 机械专硕270求调剂，接受跨专业 +12 老师看看我吧aba 2026-04-09 14/700 2026-04-11 10:21 by laoshidan
[考研] 求调剂 +13 雪逢冬 2026-04-10 13/650 2026-04-11 09:58 by 猪会飞
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +27 努力奋斗112 2026-04-07 30/1500 2026-04-10 15:06 by Kilig0317
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭