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遇到大难题~~~
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本人现在从基因组上P一个基因,最初摸索的退火温度为58度,后来做大PCR体系,回收连T载体,筛选菌落做菌落PCR,同时还做了单引物验证,电泳结果显示:只添加了下游引物的PCR跟添加了上下游引物的PCR结果一样,均得到了一样大小的目的片段。。。 于是老师让我继续优化PCR体系与条件,昨天做了个梯度PCR,做了5个梯度,退火温度分别为55、56、57、58、59,电泳后结果发现55、56有条带,而57~59均没有。。。。。现在都不知道怎么做,还有,我的PCR结果非特异性条带很多。。。。 附上图片以说明问题,等待高手的指引。。。。 |
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zhaocy8903
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