应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 核酸酶切请达人指教
汕头大学海洋科学接受调剂
71/1返回列表
查看: 488  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 核酸酶切请达人指教

我用HindIII和KPNI进行双酶切，体系如下
10  M buffer                      1uL
质粒                   5uL
双蒸水                 3uL
HindIII（10U/uL)              0.5 uL
KPNI（10U/uL)                0.5 uL


总共 10uL，4小时电泳发现有一条酶切条带，本以为是没切好，7小时候再跑电泳，什么都没有啦，不知道是怎么回事？请高人指点！！！急急急！！！！

[ Last edited by amisking on 2009-9-24 at 21:17 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-24 21:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
这两种酶在质粒上有几个酶切位点？4小时的时候应该有几条带？
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-24 21:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

000zgh000

新虫 (小有名气)
各有一个酶切位点，条带应该在5000和2500处各有一条，奇怪的是在1000处有一条，7小时后再跑电泳全成了涂片，不知道什么原因，非常着急！！！！
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-24 21:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你的体系及条带应该是验证质粒的吧？你还是切那么多质粒，把体系扩大到20ul，两种酶均用1ul，37度两小时试试。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-09-24 21:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、将质粒的量减少，做20ul体系。
2。你做的那两个需要分步酶切，Kpn 比较特殊，这就是你为什么切不开的原因！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-25 08:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的酶，如果是NEB的话，buffer请用 NEB2 + BSA，我一直用这两个酶切，没有问题啊，质粒少点400ng就足够电泳的了，体系最好用20微升的
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2009-09-25 20:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哥们儿，你的质粒用什么提的？用分氯仿抽了么？
某些菌里面的DNA内切酶很多的，37°一会就把DNA给搞定了……
赞一下(1人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
7楼2009-10-09 14:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 000zgh000 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学070300 求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-12 19/950 2026-04-13 20:38 by jasonhanqing
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 290调剂生物0860 +28 哇哈哈，。 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 01:16 by 幸免 ..
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 求助调剂，跨调 +12 X十甫寸Y 2026-04-11 12/600 2026-04-12 10:20 by zhouyuwinner
[考研] 化学工程调剂289 +44 yang婷 2026-04-07 50/2500 2026-04-12 02:36 by 秋豆菜芽
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +8 xu@841019 2026-04-11 8/400 2026-04-11 10:46 by qingpingzhu
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +4 在线求有学上 2026-04-07 4/200 2026-04-07 19:47 by biomichael
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭