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汕头大学海洋科学接受调剂
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000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 核酸酶切请达人指教

我用HindIII和KPNI进行双酶切,体系如下
10  M buffer                      1uL
质粒                   5uL
双蒸水                 3uL
HindIII(10U/uL)              0.5 uL
KPNI(10U/uL)                0.5 uL


总共 10uL,4小时电泳发现有一条酶切条带,本以为是没切好,7小时候再跑电泳,什么都没有啦,不知道是怎么回事?请高人指点!!!急急急!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-9-24 at 21:17 ]
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、将质粒的量减少,做20ul体系。
2。你做的那两个需要分步酶切,Kpn 比较特殊,这就是你为什么切不开的原因!
5楼2009-09-25 08:16:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

这两种酶在质粒上有几个酶切位点?4小时的时候应该有几条带?
2楼2009-09-24 21:21:57
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000zgh000

新虫 (小有名气)

各有一个酶切位点,条带应该在5000和2500处各有一条,奇怪的是在1000处有一条,7小时后再跑电泳全成了涂片,不知道什么原因,非常着急!!!!
3楼2009-09-24 21:26:46
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你的体系及条带应该是验证质粒的吧?你还是切那么多质粒,把体系扩大到20ul,两种酶均用1ul,37度两小时试试。
4楼2009-09-24 21:46:40
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