应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 核酸酶切请达人指教
71/1返回列表
查看: 457  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 核酸酶切请达人指教

我用HindIII和KPNI进行双酶切，体系如下
10  M buffer                      1uL
质粒                   5uL
双蒸水                 3uL
HindIII（10U/uL)              0.5 uL
KPNI（10U/uL)                0.5 uL


总共 10uL，4小时电泳发现有一条酶切条带，本以为是没切好，7小时候再跑电泳，什么都没有啦，不知道是怎么回事？请高人指点！！！急急急！！！！

[ Last edited by amisking on 2009-9-24 at 21:17 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-24 21:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
这两种酶在质粒上有几个酶切位点？4小时的时候应该有几条带？
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-24 21:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

000zgh000

新虫 (小有名气)
各有一个酶切位点，条带应该在5000和2500处各有一条，奇怪的是在1000处有一条，7小时后再跑电泳全成了涂片，不知道什么原因，非常着急！！！！
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-24 21:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你的体系及条带应该是验证质粒的吧？你还是切那么多质粒，把体系扩大到20ul，两种酶均用1ul，37度两小时试试。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-09-24 21:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、将质粒的量减少，做20ul体系。
2。你做的那两个需要分步酶切，Kpn 比较特殊，这就是你为什么切不开的原因！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-25 08:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的酶，如果是NEB的话，buffer请用 NEB2 + BSA，我一直用这两个酶切，没有问题啊，质粒少点400ng就足够电泳的了，体系最好用20微升的
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2009-09-25 20:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哥们儿，你的质粒用什么提的？用分氯仿抽了么？
某些菌里面的DNA内切酶很多的，37°一会就把DNA给搞定了……
赞一下(1人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
7楼2009-10-09 14:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 000zgh000 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 299求调剂 +5 某某某某位 2026-03-21 5/250 2026-03-23 23:36 by 热情沙漠
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭