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汕头大学海洋科学接受调剂
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000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 核酸酶切请达人指教

我用HindIII和KPNI进行双酶切,体系如下
10  M buffer                      1uL
质粒                   5uL
双蒸水                 3uL
HindIII(10U/uL)              0.5 uL
KPNI(10U/uL)                0.5 uL


总共 10uL,4小时电泳发现有一条酶切条带,本以为是没切好,7小时候再跑电泳,什么都没有啦,不知道是怎么回事?请高人指点!!!急急急!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-9-24 at 21:17 ]
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的酶,如果是NEB的话,buffer请用 NEB2 + BSA,我一直用这两个酶切,没有问题啊,质粒少点400ng就足够电泳的了,体系最好用20微升的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2009-09-25 20:04:26
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查看全部 7 个回答

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

这两种酶在质粒上有几个酶切位点?4小时的时候应该有几条带?
2楼2009-09-24 21:21:57
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000zgh000

新虫 (小有名气)

各有一个酶切位点,条带应该在5000和2500处各有一条,奇怪的是在1000处有一条,7小时后再跑电泳全成了涂片,不知道什么原因,非常着急!!!!
3楼2009-09-24 21:26:46
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你的体系及条带应该是验证质粒的吧?你还是切那么多质粒,把体系扩大到20ul,两种酶均用1ul,37度两小时试试。
4楼2009-09-24 21:46:40
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