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酶切连接构建载体一直连接不上
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切入DNA片段1385bp，载体4729bp 跑胶看亮度，片段大概10ng/ul，载体大概40ng/ul 片段加了15ul，载体2ul，buffer2ul，T4连接酶1ul，摩尔比大概1:6.5。 为什么一直连接不上呢？amp板上一个单克隆都没有 卡在这个实验已经一个月多了真的头秃了！ 求帮助！ 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2022-08-07 11:04:02
3楼2022-08-08 18:23:18
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昨天又做了两板，载体53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，仪器测得浓度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10体系，1:7做了20体系，都没有长单克隆，我真的好迷茫啊，到底问题出在哪里了 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2022-08-10 09:37:30
tjj451679479
版主
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5楼2022-08-11 11:42:12
6楼2022-08-11 14:53:17
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片段是转ta克隆再酶切的，酶切下来是两条带，载体和片段。不过我想起当时切目的载体质粒的时候，大概没切完全，有三条带，就是除了载体和两酶切位点片段以外还有条完整质粒的带，但我当时就直接切了载体的带回收了 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2022-08-11 14:57:49
8楼2022-08-16 10:42:33
9楼2022-08-18 01:42:22
10楼2022-08-18 01:43:07
