应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切连接构建载体一直连接不上
51/1返回列表
查看: 1467  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 Milkttttea 的 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

[交流] 酶切连接构建载体一直连接不上

切入DNA片段1385bp，载体4729bp

跑胶看亮度，片段大概10ng/ul，载体大概40ng/ul

片段加了15ul，载体2ul，buffer2ul，T4连接酶1ul，摩尔比大概1:6.5。

为什么一直连接不上呢？amp板上一个单克隆都没有

卡在这个实验已经一个月多了真的头秃了！

求帮助！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

青椒之路

» 猜你喜欢
1楼 2022-08-07 11:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 青椒之路 at 2022-08-16 10:42:33
这个应该不难吧，可能还是配比的问题

1:3，1:6，1:7，1:9都做过了…现在换无缝克隆试一下了。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2022-08-18 01:42:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
连接酶用的是takara家的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2022-08-07 11:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司静Jing.

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DNA片段质量不好吧（浓度 纯度）
赞一下 回复此楼
3楼2022-08-08 18:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 司静Jing. at 2022-08-08 18:23:18
DNA片段质量不好吧（浓度 纯度）

昨天又做了两板，载体53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，仪器测得浓度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10体系，1:7做了20体系，都没有长单克隆，我真的好迷茫啊，到底问题出在哪里了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2022-08-10 09:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 8/400 2026-10-07 22:49 by eCkHj1vrFL0S
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 7/350 2026-10-07 22:49 by eCkHj1vrFL0S
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 8/400 2026-10-07 22:31 by kUQbiRsIeOpF
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 10/500 2026-10-07 22:11 by kUQbiRsIeOpF
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 14/700 2026-10-07 22:09 by kUQbiRsIeOpF
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 FUSxPqiIHRjH 2026-10-04 12/600 2026-10-07 21:51 by kUQbiRsIeOpF
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FUSxPqiIHRjH 2026-10-04 13/650 2026-10-07 21:49 by kUQbiRsIeOpF
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 FUSxPqiIHRjH 2026-10-04 10/500 2026-10-07 21:47 by kUQbiRsIeOpF
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 max7zaruFVS8 2026-10-06 3/150 2026-10-07 17:01 by kUQbiRsIeOpF
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 z1aZaKkVi71s 2026-10-06 3/150 2026-10-07 16:31 by kUQbiRsIeOpF
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 z1aZaKkVi71s 2026-10-06 3/150 2026-10-07 16:09 by kUQbiRsIeOpF
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 z1aZaKkVi71s 2026-10-06 3/150 2026-10-07 15:41 by kUQbiRsIeOpF
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 z1aZaKkVi71s 2026-10-05 3/150 2026-10-07 15:07 by kUQbiRsIeOpF
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 z1aZaKkVi71s 2026-10-05 3/150 2026-10-07 14:49 by kUQbiRsIeOpF
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 9/450 2026-10-07 11:21 by EXuX9l7TjjIY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 8/400 2026-10-07 11:11 by EXuX9l7TjjIY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 9/450 2026-10-07 11:07 by EXuX9l7TjjIY
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 8/400 2026-10-07 11:01 by EXuX9l7TjjIY
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FlhJF7cq3uT3 2026-10-04 8/400 2026-10-07 10:21 by EXuX9l7TjjIY
[教师之家] 寻找合作团队 +4 悠悠2003 2026-10-01 4/200 2026-10-04 15:18 by Zh_fish
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭