应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切连接构建载体一直连接不上
51/1返回列表
查看: 1432  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 Milkttttea 的 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

[交流] 酶切连接构建载体一直连接不上

切入DNA片段1385bp，载体4729bp

跑胶看亮度，片段大概10ng/ul，载体大概40ng/ul

片段加了15ul，载体2ul，buffer2ul，T4连接酶1ul，摩尔比大概1:6.5。

为什么一直连接不上呢？amp板上一个单克隆都没有

卡在这个实验已经一个月多了真的头秃了！

求帮助！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

青椒之路

» 猜你喜欢
1楼 2022-08-07 11:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tjj451679479 at 2022-08-11 11:42:12
酶切位点是否确认过，抗性是否确认过，实在不行重新把片段准备一下（可以测个序看看）

片段是转ta克隆再酶切的，酶切下来是两条带，载体和片段。不过我想起当时切目的载体质粒的时候，大概没切完全，有三条带，就是除了载体和两酶切位点片段以外还有条完整质粒的带，但我当时就直接切了载体的带回收了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2022-08-11 14:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
连接酶用的是takara家的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2022-08-07 11:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司静Jing.

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DNA片段质量不好吧（浓度 纯度）
赞一下 回复此楼
3楼2022-08-08 18:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 司静Jing. at 2022-08-08 18:23:18
DNA片段质量不好吧（浓度 纯度）

昨天又做了两板，载体53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，仪器测得浓度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10体系，1:7做了20体系，都没有长单克隆，我真的好迷茫啊，到底问题出在哪里了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2022-08-10 09:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-10-01 21:59 by Equinoxhua
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-10-01 21:07 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 8/400 2026-10-01 19:08 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-10-01 09:23 by Equinoxhua
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:52 by Z9YWQ5EAO3qp
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭