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最近在做毕赤酵母蛋白诱导，总是失败，想请个好心人帮帮忙，谢谢了 已有4人参与
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老师让做毕赤酵母，电转总是长不出来，有很多问题，希望有好心人可以帮帮忙。 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2022-07-09 10:38:14
abcjlm
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8楼2022-07-22 09:24:45
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10楼2022-07-25 10:36:03
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11楼2022-07-25 11:05:38
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太谢谢了，我先大概说一下我的步骤吧。 我现在转的酵母是GS115，载体是Ppic9k，SacI酶切。下面是酶切跑胶对照图片。 酵母感受态的制备就是四度下水洗，山梨醇各洗三次。做了几次了，也有现做现转的，也有放在负八十保存后再转的。 电压1500，2000都试过，是艾本德的电转仪。电转后加入1ML山梨醇，30℃水浴两小时涂板。 涂的板是缺HIS板。 就是这瓶和葡萄糖加琼脂A配成的培养基。   发自小木虫Android客户端 |
3楼2022-07-09 16:13:45
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4楼2022-07-15 15:29:06
5楼2022-07-18 15:13:41
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6楼2022-07-19 17:19:42
7楼2022-07-21 12:44:35
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浓度是三十多ng/μI；用了二十多微升，确实有点低，我抱着侥幸心理了。因为我想如果正常的话，应该不会一个也不长吧。 老师只是给了我一些构建好的质粒进行转化，让我试试。 山梨醇水洗和四度离心的时候离心管会短暂拿出冰盒。电击杯还真没有预冷，混匀菌液和质粒后，会在冰上预冷一下。 板应该没问题，因为实验室里有构建好的KM71菌，在板上可以正常生长。 电击后加入山梨醇了就可以水浴涂板了吗 发自小木虫Android客户端 |
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9楼2022-07-22 22:56:20
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