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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样克隆抗性基因及其启动子
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 怎样克隆抗性基因及其启动子已有2人参与

各位大虾好，小弟最近要从pmg36e上克隆出红霉素的抗性基因及其启动子序列，用于基因敲除时作为抗性标记，现在不知道该抗生素的上游启动子及其SD序列，请大家帮帮忙，怎样找到启动子及其SD序列，不胜感激
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1楼2009-09-04 15:48:07
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
huangdi07(金币+1,VIP+0):我用软件分析了，没发现启动子啊 9-5 19:02
pmg36e的图谱上应该会说明那段序列是什么，或者你知道序列用软件分析一下
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-09-04 16:48:05
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
huangdi07(金币+1,VIP+0):什么影响啊 9-5 19:02
如果实在找不到就直接在抗性基因起始密码子前多扩增200bp左右，一般都会包括启动子，我想对你的实验有很大的影响。
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3楼2009-09-04 17:09:44
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)
pmg36e是那个公司的？应该有图谱的，你查查吧。
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4楼2009-09-04 18:33:34
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changes

木虫 (正式写手)
，可能公司能提供图谱。
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5楼2009-09-04 21:36:49
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

pmg36e只有一个抗性基因，为何可以在两种细菌中起到筛选作用啊

我现在用得是在大肠和枯草中的穿梭型质粒，但是只有一种抗性基因标记，我想问是因为这个抗性基因的启动子和sd序列在这两种菌里都能够被识别？质粒的图谱我放到了附件里面，我要从里面克隆出红霉素的抗性基因，怎么把它的启动子克隆出来啊
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6楼2009-09-05 19:09:04
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银杏下

金虫 (小有名气)
错了，我是想说应该没有什么影响
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7楼2009-09-06 22:51:52
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由田120516

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 10:06:48
引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2009-09-04 15:48:07:
各位大虾好，小弟最近要从pmg36e上克隆出红霉素的抗性基因及其启动子序列，用于基因敲除时作为抗性标记，现在不知道该抗生素的上游启动子及其SD序列，请大家帮帮忙，怎样找到启动子及其SD序列，不胜感激

你好，我最近做的课题也是基因敲除，也要用到pMG36e上的红霉素抗性基因做标记基因，我不知道你用的自杀质粒是什么质粒，如果是pUC18的话，你不用扩增pmg36e上的启动子，pUC18的多克隆位点前面就有启动子。
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8楼2011-01-13 08:48:31
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周志惠

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 由田120516 at 2011-01-13 08:48:31
你好，我最近做的课题也是基因敲除，也要用到pMG36e上的红霉素抗性基因做标记基因，我不知道你用的自杀质粒是什么质粒，如果是pUC18的话，你不用扩增pmg36e上的启动子，pUC18的多克隆位点前面就有启动子。...

你好，我最近也做红霉素抗性基因，能方便帮我查下该抗性基因在这个质粒上的序列么？另外PUC18上面有启动子么？
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9楼2015-05-28 13:08:58
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