应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】请教蛋白纯化问题
101/1返回列表
查看: 920  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

高丹

新虫 (初入文坛)

[交流] 【交流/求助】请教蛋白纯化问题

请教蛋白纯化问题，十分感谢！
    本人目前在纯化一个蛋白，很苦恼。通过氨基酸预测该蛋白的等电点为4.47，一些参考文献上介绍该蛋白的等电点是4左右。自己小试了一下，在PH4.2，4.4 buffer 中目的蛋白确实在沉淀中。因此我用DEAE阴离子交换柱纯化目的蛋白，但是奇怪的是PH在6，7，8都不能很好的吸附在柱上（PH6，7 蛋白体系是10mM PB，PH8 蛋白体系是20mM TRIS。HCL），流穿很多。PH5的时候流穿很少，以为是吸到柱子上了呢，结果洗脱没有该蛋白i，将胶挖出来一些胶蛋白电泳也没看到目的条带。我现在就搞不懂了，PH5的条件下，蛋白哪去了？为什么PI那么低，在PH6，7，8不能吸附？

[ Last edited by amisking on 2009-12-30 at 21:43 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-07-14 10:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wql1828

木虫 (小有名气)

helix
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你重复过吗？   会不会是deae的问题？  还有你做了确定洗脱液的ph实验吗?  一般情况确定后再加1个ph！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-07-14 11:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的pI是9.14，但是在pH7的时候还是挂不到阳离子柱上。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-07-14 12:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高丹

新虫 (初入文坛)
重复过一次，两次DEAE胶不同。PH5.0 时洗脱液PH也是5.0 里面有1M nacl, 您说的再加一个PH是6.0洗脱吗？还是什么意思？
赞一下 回复此楼
4楼2009-07-14 13:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wql1828

木虫 (小有名气)

helix
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是   你用ph6.0的洗脱液试一试  ！！！     我的意思是确定你的目的蛋白能被静电作用吸附时的ph   然后再加一个ph  作为洗脱缓冲液！！  原因是这样洗脱效果会更好！！！  如果ph过高会洗不下来的   

     还有可能有些特殊蛋白对阴离子交换柱无反应     可以换阳离子交换柱纯试一试  但是前提保证你的目的蛋白有活性不变性
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-07-14 15:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
????
回复此楼
6楼2009-07-14 16:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2009-07-14 18:21:43
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

w19840308

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ph5时是不是因为你挖出来很少的胶，造成假阴性的结果，你本身的蛋白加样量是多少计算过么？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-07-14 20:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简约豆豆

金虫 (小有名气)

离子柱

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by aaaaaa1380 at 2009-7-14 16:59:
学习学习

请问，具体是怎么用EP管测试不同Ph的结合能力的？另外EP管是什么管啊？
我做的是分离纯化一种小肽，也是不知道等电点，所以在选择离子柱的时候不知道怎么选择，看到你的帖子，就特别想知道，你说的方法是怎么操作的？
谢谢!
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-12-30 21:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简约豆豆

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by enclve at 2009-7-14 18:21:
1.都有文献了，没给个经典的步骤么？
2.不要去预测，没有用，，有很多蛋白质电荷分布特别不均匀，在离子交换的方法时候都是部分结合，部分流出。
3.你愿意的话，用半天时间在EP管中测试不同pH的结合能力，然后跑 ...

请问，具体是怎么用EP管测试不同Ph的结合能力的？另外EP管是什么管啊？
我做的是分离纯化一种小肽，也是不知道等电点，所以在选择离子柱的时候不知道怎么选择，看到你的帖子，就特别想知道，你说的方法是怎么操作的？
谢谢!
赞一下 回复此楼
10楼2009-12-30 21:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高丹 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿厦大0856，306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 326求调剂 +5 Shansyn 2026-04-10 5/250 2026-04-10 22:23 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 284求调剂 +7 让我上岸吧阿西 2026-04-09 7/350 2026-04-09 18:59 by haironglove
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 机械工程264学硕求调剂 +3 qiushangxian 2026-04-06 3/150 2026-04-08 01:53 by Linzejun
[考研] 调剂求助（生物与医药） +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭