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【交流/求助】请教蛋白纯化问题
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请教蛋白纯化问题，十分感谢！ 本人目前在纯化一个蛋白，很苦恼。通过氨基酸预测该蛋白的等电点为4.47，一些参考文献上介绍该蛋白的等电点是4左右。自己小试了一下，在PH4.2，4.4 buffer 中目的蛋白确实在沉淀中。因此我用DEAE阴离子交换柱纯化目的蛋白，但是奇怪的是PH在6，7，8都不能很好的吸附在柱上（PH6，7 蛋白体系是10mM PB，PH8 蛋白体系是20mM TRIS。HCL），流穿很多。PH5的时候流穿很少，以为是吸到柱子上了呢，结果洗脱没有该蛋白i，将胶挖出来一些胶蛋白电泳也没看到目的条带。我现在就搞不懂了，PH5的条件下，蛋白哪去了？为什么PI那么低，在PH6，7，8不能吸附？ [ Last edited by amisking on 2009-12-30 at 21:43 ] |
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