应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 异源表达蛋白遇到问题
192/2返回列表上一页12
查看: 4649  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fast-rui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张凡云 at 2019-06-12 09:20:44
两个方案，用pGEX4T-1这样的融合表达系统，二是用rosetta这样的宿主菌

好滴，谢谢，我查一下相关资料

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
11楼2019-06-12 10:09:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Excalibur1

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试包涵体复性，或者共表达一个分子伴侣

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2019-06-12 10:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fast-rui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by Excalibur1 at 2019-06-12 10:39:38
试试包涵体复性，或者共表达一个分子伴侣

好的呢，谢谢，我也打算这批诱导结束以后包涵体同时复性看看

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2019-06-12 11:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fast-rui

新虫 (小有名气)
我还想问一下，摇到od以后不是要等菌稍微冷却一点再加iptg嘛，这个等待的时间最长不超过多久合适呢？因为我今天做的对照和一个实验组已经摇到了，对照等了快一个小时了，实验组有20分钟了，但是还有三瓶没摇起来，等它们摇起来我觉得要好久好久。我是先不管它们直接诱导比较好，让那三瓶下次做？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
14楼2019-06-12 17:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对于在温度稍高容易形成包涵体的蛋白质，摇到od以后要等菌液冷却一点再加iptg，因为包涵体的形成有可能形成惯性，一旦开始形成，扭转需要时间。如果不容易形成包涵体的蛋白质，不必降温再诱导。

用BL21容易形成包涵体，用大肠杆菌的其它菌株只能是改善，不会根治，因为同一个物种的折叠系统大同小异。换宿主可能要换物种。

加一段融合蛋白质可能改善但不一定根治，而且不能确定会不会对蛋白质的本身性质有改变。具体要什么样的性质或可以接受什么样的性质，问你导师。

复性不一定可行，因为不一定能完全复性，而且即使部分复性形成可溶蛋白质，其性质也不一定与正确折叠得到的蛋白质性质一致。具体要什么样的性质或可以接受什么样的性质，问你导师。

你把长得快的菌液拿出来放在室温下短时间不会影响菌体状态，最多就是因为接触氧气不足造成生长缓慢。要是你担心，就放在温度稍低的摇床继续摇，大肠杆菌在28度的生长温度约为37度下八分之一。

要是还有能够维持更低温度的摇床，就继续降低温度。大肠杆菌在iptg存在时不会完全停止生长，但在这么低的温度下就更慢。OD600为1.5时诱导，10度。

很低温度时，摇床压力大，或直接走极端，放在4度冰箱时不时拿起来摇一摇。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
15楼2019-06-14 00:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kindermoon

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
增加可溶性表达可以等OD600大一点比如1.0以上再加IPTG诱导，诱导时间一般2-3小时其实就够了。温度25度或者16度都可以。还是不行的话只能复性（后期处理麻烦还未必能复性成功）或者换别的工程菌试试。如果有少量可溶性的就可以了，大不了多摇几次的事。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2019-06-14 13:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a336688

木虫 (小有名气)

追梦
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2019-06-14 00:40:45
对于在温度稍高容易形成包涵体的蛋白质，摇到od以后要等菌液冷却一点再加iptg，因为包涵体的形成有可能形成惯性，一旦开始形成，扭转需要时间。如果不容易形成包涵体的蛋白质，不必降温再诱导。

用BL21容易形成包 ...

你说的大多无根据吧，全凭经验不靠谱的，至少很多观点不敢苟同
赞一下 回复此楼
17楼2019-06-18 09:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by a336688 at 2019-06-18 09:01:40
你说的大多无根据吧，全凭经验不靠谱的，至少很多观点不敢苟同...

我是凭经验，当然，同一个实验换个人或者地方做可能有不同结果。不过，能够有经验，就表示首先要有知识，不然连做的资格都没有。另外，我在整个生物医药区几个版块的EPI总和好像是排第二名的2倍？太久不来，不记得了。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
18楼2019-06-18 14:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fast-rui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2019-06-14 00:40:45
对于在温度稍高容易形成包涵体的蛋白质，摇到od以后要等菌液冷却一点再加iptg，因为包涵体的形成有可能形成惯性，一旦开始形成，扭转需要时间。如果不容易形成包涵体的蛋白质，不必降温再诱导。

用BL21容易形成包 ...

您好，我还想问一下，我想试一下更低温度的诱导（比如4℃或者10℃），那么OD值应该摇到多少合适？要1.0以上吗？和0.6-0.8有啥区别？
如果要这两个温度诱导的话，是不是诱导时间也不用过夜，2-3h就够了？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
19楼2019-06-25 10:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fast-rui 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +9 Isak0320 2026-10-12 13/650 2026-10-13 11:57 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭