| 查看: 4445 | 回复: 18 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[交流]
异源表达蛋白遇到问题 已有8人参与
|
|||||
|
本人最近在做异源表达，用的pet28a表达载体，宿主菌是BL21，od摇到0.6-0.8，16℃诱导19h，做了几次蛋白大部分都在包涵体中，iptg浓度试过0.1-0.8mM的。这次打算试试培养基多调几个ph试试。 但是想问就是我的蛋白等电点是6.74，LB的ph会影响表达吗？破碎的时候蛋白裂解液的ph设为多少比较合适？有没有大神可以给我点建议，看看能不能把包涵体减少。 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域
已经有44人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有29人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有12人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有11人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有10人回复
-
阿姨
已经有4人回复
-
一作与独作在应聘高校教师时区别大吗
已经有4人回复
-
静等基金结果
已经有21人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有28人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有6人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19793.2
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.7小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
对于在温度稍高容易形成包涵体的蛋白质，摇到od以后要等菌液冷却一点再加iptg，因为包涵体的形成有可能形成惯性，一旦开始形成，扭转需要时间。如果不容易形成包涵体的蛋白质，不必降温再诱导。 用BL21容易形成包涵体，用大肠杆菌的其它菌株只能是改善，不会根治，因为同一个物种的折叠系统大同小异。换宿主可能要换物种。 加一段融合蛋白质可能改善但不一定根治，而且不能确定会不会对蛋白质的本身性质有改变。具体要什么样的性质或可以接受什么样的性质，问你导师。 复性不一定可行，因为不一定能完全复性，而且即使部分复性形成可溶蛋白质，其性质也不一定与正确折叠得到的蛋白质性质一致。具体要什么样的性质或可以接受什么样的性质，问你导师。 你把长得快的菌液拿出来放在室温下短时间不会影响菌体状态，最多就是因为接触氧气不足造成生长缓慢。要是你担心，就放在温度稍低的摇床继续摇，大肠杆菌在28度的生长温度约为37度下八分之一。 要是还有能够维持更低温度的摇床，就继续降低温度。大肠杆菌在iptg存在时不会完全停止生长，但在这么低的温度下就更慢。OD600为1.5时诱导，10度。 很低温度时，摇床压力大，或直接走极端，放在4度冰箱时不时拿起来摇一摇。 |
15楼2019-06-14 00:40:45
2楼2019-06-11 21:03:08
3楼2019-06-11 22:22:47
4楼2019-06-11 22:44:34
