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异源表达蛋白遇到问题 已有8人参与
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本人最近在做异源表达，用的pet28a表达载体，宿主菌是BL21，od摇到0.6-0.8，16℃诱导19h，做了几次蛋白大部分都在包涵体中，iptg浓度试过0.1-0.8mM的。这次打算试试培养基多调几个ph试试。 但是想问就是我的蛋白等电点是6.74，LB的ph会影响表达吗？破碎的时候蛋白裂解液的ph设为多少比较合适？有没有大神可以给我点建议，看看能不能把包涵体减少。 发自小木虫IOS客户端 |
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9楼2019-06-12 10:08:00
10楼2019-06-12 10:08:49
11楼2019-06-12 10:09:11
13楼2019-06-12 11:32:47
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我还想问一下，摇到od以后不是要等菌稍微冷却一点再加iptg嘛，这个等待的时间最长不超过多久合适呢？因为我今天做的对照和一个实验组已经摇到了，对照等了快一个小时了，实验组有20分钟了，但是还有三瓶没摇起来，等它们摇起来我觉得要好久好久。我是先不管它们直接诱导比较好，让那三瓶下次做？ 发自小木虫IOS客户端 |
14楼2019-06-12 17:39:39
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您好，我还想问一下，我想试一下更低温度的诱导（比如4℃或者10℃），那么OD值应该摇到多少合适？要1.0以上吗？和0.6-0.8有啥区别？ 如果要这两个温度诱导的话，是不是诱导时间也不用过夜，2-3h就够了？ 发自小木虫IOS客户端 |
19楼2019-06-25 10:45:40