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fast-rui

新虫 (小有名气)

[交流] 异源表达蛋白遇到问题 已有8人参与

本人最近在做异源表达,用的pet28a表达载体,宿主菌是BL21,od摇到0.6-0.8,16℃诱导19h,做了几次蛋白大部分都在包涵体中,iptg浓度试过0.1-0.8mM的。这次打算试试培养基多调几个ph试试。
但是想问就是我的蛋白等电点是6.74,LB的ph会影响表达吗?破碎的时候蛋白裂解液的ph设为多少比较合适?有没有大神可以给我点建议,看看能不能把包涵体减少。

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fast-rui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2019-06-14 00:40:45
对于在温度稍高容易形成包涵体的蛋白质,摇到od以后要等菌液冷却一点再加iptg,因为包涵体的形成有可能形成惯性,一旦开始形成,扭转需要时间。如果不容易形成包涵体的蛋白质,不必降温再诱导。

用BL21容易形成包 ...

您好,我还想问一下,我想试一下更低温度的诱导(比如4℃或者10℃),那么OD值应该摇到多少合适?要1.0以上吗?和0.6-0.8有啥区别?
如果要这两个温度诱导的话,是不是诱导时间也不用过夜,2-3h就够了?

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19楼2019-06-25 10:45:40
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biosci

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换融合蛋白表达试试

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2楼2019-06-11 21:03:08
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小太阳2017

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
裂解液调成8吧,LB的ph觉得影响不大,

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3楼2019-06-11 22:22:47
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fast-rui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小太阳2017 at 2019-06-11 22:22:47
裂解液调成8吧,LB的ph觉得影响不大,

好滴,谢谢

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4楼2019-06-11 22:44:34
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