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fast-rui

新虫 (小有名气)

[交流] 异源表达蛋白遇到问题 已有8人参与

本人最近在做异源表达,用的pet28a表达载体,宿主菌是BL21,od摇到0.6-0.8,16℃诱导19h,做了几次蛋白大部分都在包涵体中,iptg浓度试过0.1-0.8mM的。这次打算试试培养基多调几个ph试试。
但是想问就是我的蛋白等电点是6.74,LB的ph会影响表达吗?破碎的时候蛋白裂解液的ph设为多少比较合适?有没有大神可以给我点建议,看看能不能把包涵体减少。

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kindermoon

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
增加可溶性表达可以等OD600大一点比如1.0以上再加IPTG诱导,诱导时间一般2-3小时其实就够了。温度25度或者16度都可以。还是不行的话只能复性(后期处理麻烦还未必能复性成功)或者换别的工程菌试试。如果有少量可溶性的就可以了,大不了多摇几次的事。
16楼2019-06-14 13:40:23
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换融合蛋白表达试试

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2楼2019-06-11 21:03:08
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小太阳2017

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
裂解液调成8吧,LB的ph觉得影响不大,

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3楼2019-06-11 22:22:47
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fast-rui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小太阳2017 at 2019-06-11 22:22:47
裂解液调成8吧,LB的ph觉得影响不大,

好滴,谢谢

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4楼2019-06-11 22:44:34
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