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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 异源表达蛋白遇到问题
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fast-rui

新虫 (小有名气)

[交流] 异源表达蛋白遇到问题 已有8人参与

本人最近在做异源表达，用的pet28a表达载体，宿主菌是BL21，od摇到0.6-0.8，16℃诱导19h，做了几次蛋白大部分都在包涵体中，iptg浓度试过0.1-0.8mM的。这次打算试试培养基多调几个ph试试。
但是想问就是我的蛋白等电点是6.74，LB的ph会影响表达吗？破碎的时候蛋白裂解液的ph设为多少比较合适？有没有大神可以给我点建议，看看能不能把包涵体减少。

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1楼 2019-06-11 20:58:46
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kindermoon

木虫 (小有名气)
★
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增加可溶性表达可以等OD600大一点比如1.0以上再加IPTG诱导，诱导时间一般2-3小时其实就够了。温度25度或者16度都可以。还是不行的话只能复性（后期处理麻烦还未必能复性成功）或者换别的工程菌试试。如果有少量可溶性的就可以了，大不了多摇几次的事。
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16楼2019-06-14 13:40:23
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换融合蛋白表达试试

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2楼2019-06-11 21:03:08
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小太阳2017

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
裂解液调成8吧，LB的ph觉得影响不大，

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3楼2019-06-11 22:22:47
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fast-rui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小太阳2017 at 2019-06-11 22:22:47
裂解液调成8吧，LB的ph觉得影响不大，

好滴，谢谢

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4楼2019-06-11 22:44:34
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