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专业: 食品科学

[交流] 构建重组质粒屡次失败已有15人参与

构建重组质粒，经快速验证重组质粒比空质粒还要小，是什么情况，一直找不到原因，我就空质粒也进行了酶切，没有问题。
现在构建质粒四个月了，一直构建不出来，构建出来一个也是全凭运气！

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1楼2018-08-30 10:25:49

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引用回帖:

3楼: Originally posted by macgray11 at 2018-08-30 11:09:35
把你的实验详细说明一下，可以帮你分析看看

载体6000bp左右，目的片段1700bp左右，酶切EcoRI、BamHI，酶切量50ng，各切8管回收。往往酶切载体和目的片段浓度都不算高，不超过10ng/ul。T4连接5小时，有时12小时。转化TOP10中，LB+Em 37℃培养24小时，挑菌快速验证，质粒有的与空质粒大小一样，有的比空质粒小。经酶切验证，有一个质粒酶切出两条带，但大小与实际不符。