24小时热门版块排行榜    

查看: 4312  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ZYJLL

新虫 (小有名气)

[求助] BamH1和MluI双酶切 已有2人参与

求助!本人纯分子克隆的小白,但是不好意思所有的问题都问师兄师姐,还望各种虫友相助!
最近用BamH1和MluI双酶切,都是NEB的HF省时酶,cusmart缓冲液,公司说明书上说这两种酶在cusmart中效率为100%,但是我现在的载体根本切不开,我在网上查的MluI这个酶效率比较低,不加保护碱基时效率为0,有保护碱基50.我的insert加了保护碱基,可是载体是公司买的没有保护碱基,分别试了双酶切2小时和7小时,但是最后的没有阳性克隆,各位大神帮忙分析一下是怎么回事呀!

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-07-26 22:21:42
ZYJLL: 金币+2, ★★★很有帮助 2018-07-29 16:02:24
我们用过NEB的MluI限制性内切酶,感觉酶切效果还不错,所谓的保护性碱基就类似于作为限制性内切酶的支撑点(好像是这样的哈),并不只有网上查的那些碱基才能作为保护性碱基,大部分酶切位点两边有碱基,酶切效率都不会太差。。。
4楼2018-07-18 11:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

莫落

木虫 (正式写手)

载体怎么会没有保护碱基呢

发自小木虫IOS客户端
2楼2018-07-17 18:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)

都载体了...都是保护性碱基

发自小木虫Android客户端
3楼2018-07-18 00:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

macgray11

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-26 22:21:56
ZYJLL: 金币+2 2018-07-29 16:02:55
本帖内容被屏蔽

5楼2018-07-18 12:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见