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酵母蛋白His标签不挂Ni柱
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求教各位大咖： 近日一直在做一个酵母表达蛋白的纯化，pPINK载体，C端带His标签，怎么都不挂Ni-NTA柱子。体系用的20mM PBS+0.35M NaCl，洗脱加0.5M咪唑，pH7.4。纯化得率只有10%。求教各位大咖。 |
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分泌表达蛋白都在培养基里吧？不知道你上柱子之前是怎么处理的。我之前做的时候也遇到过，后来分析原因是上柱前处理不彻底，培养基某些成分影响了挂柱，而且本来分泌表达，浓度就不高。后来浓缩后换液，好了一些，但得率仍然不高。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-01-01 09:19:58
awaken2013
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4楼2018-01-01 02:19:10
awaken2013
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8楼2018-01-01 16:56:17
2楼2017-12-31 16:57:01
3楼2017-12-31 22:54:35
6楼2018-01-01 15:34:16
7楼2018-01-01 15:35:25
准备试试 9楼2018-01-01 17:01:39
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首先考虑目标样品密度，再有考虑标签是否完全暴露出来，还有样品前处理是否到位，如有还原剂或者螯合剂会影响吸附，还有就是Ni-NTA吸附载量较小，可用Ni-IDA试用，载量较大 发自小木虫Android客户端 |
10楼2018-01-02 21:50:59