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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 酵母蛋白His标签不挂Ni柱
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酵母蛋白His标签不挂Ni柱

求教各位大咖：
近日一直在做一个酵母表达蛋白的纯化，pPINK载体，C端带His标签，怎么都不挂Ni-NTA柱子。体系用的20mM PBS+0.35M NaCl，洗脱加0.5M咪唑，pH7.4。纯化得率只有10%。求教各位大咖。
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1楼 2017-12-31 16:05:26
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zyb6401

新虫 (初入文坛)
首先考虑目标样品密度，再有考虑标签是否完全暴露出来，还有样品前处理是否到位，如有还原剂或者螯合剂会影响吸附，还有就是Ni-NTA吸附载量较小，可用Ni-IDA试用，载量较大

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10楼2018-01-02 21:50:59
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
分泌表达？

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2楼2017-12-31 16:57:01
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2017-12-31 16:57:01
分泌表达？

恩 是的
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3楼2017-12-31 22:54:35
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awaken2013

铜虫 (小有名气)
可能的因素很多 c端his6可能会包埋 建议尝试换n端标签

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4楼2018-01-01 02:19:10
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