| 查看: 2357 | 回复: 16 | ||
[求助]
酵母蛋白His标签不挂Ni柱
|
||
|
求教各位大咖： 近日一直在做一个酵母表达蛋白的纯化，pPINK载体，C端带His标签，怎么都不挂Ni-NTA柱子。体系用的20mM PBS+0.35M NaCl，洗脱加0.5M咪唑，pH7.4。纯化得率只有10%。求教各位大咖。 |
回复此楼» 猜你喜欢
青C资助名额大幅增加！
已经有11人回复
-
重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50%
已经有6人回复
-
有带发论文的吗
已经有3人回复
-
导师各种操作恶心咋办
已经有13人回复
-
本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复
已经有12人回复
-
护理论文 晋升
已经有5人回复
-
求助大佬sci投稿哪个好中
已经有4人回复
-
评审感受-评审感受-评审感受
已经有14人回复
-
这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗
已经有6人回复
-
2026博士申请求助
已经有10人回复
|
分泌表达蛋白都在培养基里吧？不知道你上柱子之前是怎么处理的。我之前做的时候也遇到过，后来分析原因是上柱前处理不彻底，培养基某些成分影响了挂柱，而且本来分泌表达，浓度就不高。后来浓缩后换液，好了一些，但得率仍然不高。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-01-01 09:19:58
awaken2013
铜虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 137.9
- 红花: 15
- 帖子: 243
- 在线: 149.6小时
- 虫号: 2854550
- 注册: 2013-12-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2018-01-01 02:19:10
awaken2013
铜虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 137.9
- 红花: 15
- 帖子: 243
- 在线: 149.6小时
- 虫号: 2854550
- 注册: 2013-12-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2018-01-01 16:56:17
2楼2017-12-31 16:57:01
3楼2017-12-31 22:54:35
6楼2018-01-01 15:34:16
7楼2018-01-01 15:35:25
准备试试 9楼2018-01-01 17:01:39
|
首先考虑目标样品密度，再有考虑标签是否完全暴露出来，还有样品前处理是否到位，如有还原剂或者螯合剂会影响吸附，还有就是Ni-NTA吸附载量较小，可用Ni-IDA试用，载量较大 发自小木虫Android客户端 |
10楼2018-01-02 21:50:59