应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 酵母蛋白His标签不挂Ni柱
171/2返回列表12下一页
查看: 2387  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

renyanbin

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酵母蛋白His标签不挂Ni柱

求教各位大咖：
近日一直在做一个酵母表达蛋白的纯化，pPINK载体，C端带His标签，怎么都不挂Ni-NTA柱子。体系用的20mM PBS+0.35M NaCl，洗脱加0.5M咪唑，pH7.4。纯化得率只有10%。求教各位大咖。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-12-31 16:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mlbiosci

新虫 (正式写手)
分泌表达蛋白都在培养基里吧？不知道你上柱子之前是怎么处理的。我之前做的时候也遇到过，后来分析原因是上柱前处理不彻底，培养基某些成分影响了挂柱，而且本来分泌表达，浓度就不高。后来浓缩后换液，好了一些，但得率仍然不高。

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2018-01-01 09:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

awaken2013

铜虫 (小有名气)
可能的因素很多 c端his6可能会包埋 建议尝试换n端标签

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2018-01-01 02:19:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

awaken2013

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by renyanbin at 2018-01-01 15:35:25
N端有信号肽，怕影响切割。...

瞎担心 我做了几十个蛋白都好好的

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2018-01-01 16:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)
分泌表达？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2017-12-31 16:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2017-12-31 16:57:01
分泌表达？

恩 是的
回复此楼
3楼2017-12-31 22:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mlbiosci at 2018-01-01 09:19:58
分泌表达蛋白都在培养基里吧？不知道你上柱子之前是怎么处理的。我之前做的时候也遇到过，后来分析原因是上柱前处理不彻底，培养基某些成分影响了挂柱，而且本来分泌表达，浓度就不高。后来浓缩后换液，好了一些，但 ...

调pH到7.4.过滤去除沉淀，这个时候测活性基本没有损失。然后用等比例的HisA稀释后，低速上样。挂柱delve只有10-20%
赞一下 回复此楼
6楼2018-01-01 15:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by awaken2013 at 2018-01-01 02:19:10
可能的因素很多 c端his6可能会包埋 建议尝试换n端标签

N端有信号肽，怕影响切割。
赞一下 回复此楼
7楼2018-01-01 15:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by awaken2013 at 2018-01-01 16:56:17
瞎担心 我做了几十个蛋白都好好的
...

准备试试
回复此楼
9楼2018-01-01 17:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyb6401

新虫 (初入文坛)
首先考虑目标样品密度，再有考虑标签是否完全暴露出来，还有样品前处理是否到位，如有还原剂或者螯合剂会影响吸附，还有就是Ni-NTA吸附载量较小，可用Ni-IDA试用，载量较大

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-01-02 21:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 renyanbin 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 7/350 2026-05-16 23:17 by ue3ir18jc3
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-16 22:55 by ue3ir18jc3
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +4 市民华南虎 2026-05-12 8/400 2026-05-16 19:54 by Equinoxhua
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +6 水和泥不是水泥 2026-05-13 8/400 2026-05-16 19:50 by Equinoxhua
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ky2p12rrjj 2026-05-15 3/150 2026-05-16 18:35 by j6b2pdz07o
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 v9tggjlwd0 2026-05-15 3/150 2026-05-16 17:30 by j6b2pdz07o
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯（CAS：2793408-99-6）的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 l7k6xnh0yc 2026-05-14 5/250 2026-05-16 16:35 by x28q7dxf75
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cjf4bx70cj 2026-05-14 6/300 2026-05-16 16:17 by 0i5p09z61n
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k37jurhrau 2026-05-16 3/150 2026-05-16 13:57 by vcdazktkjx
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +11 dd921ww 2026-05-12 13/650 2026-05-16 09:16 by Howard28
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +5 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 5/250 2026-05-16 00:17 by caiyun
[考博] 西南大学考核制博士 +4 lijunjie84 2026-05-11 7/350 2026-05-15 23:20 by 同仁堂教主
[基金申请] 青C资助名额大幅增加！ +11 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 15/750 2026-05-15 14:36 by ambravo
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭