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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酵母蛋白His标签不挂Ni柱

求教各位大咖:
近日一直在做一个酵母表达蛋白的纯化,pPINK载体,C端带His标签,怎么都不挂Ni-NTA柱子。体系用的20mM PBS+0.35M NaCl,洗脱加0.5M咪唑,pH7.4。纯化得率只有10%。求教各位大咖。
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2017-12-31 16:57:01
分泌表达?

恩 是的
3楼2017-12-31 22:54:35
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

2楼2017-12-31 16:57:01
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awaken2013

铜虫 (小有名气)

可能的因素很多 c端his6可能会包埋 建议尝试换n端标签

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-01-01 02:19:10
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

分泌表达蛋白都在培养基里吧?不知道你上柱子之前是怎么处理的。我之前做的时候也遇到过,后来分析原因是上柱前处理不彻底,培养基某些成分影响了挂柱,而且本来分泌表达,浓度就不高。后来浓缩后换液,好了一些,但得率仍然不高。

发自小木虫Android客户端
5楼2018-01-01 09:19:58
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