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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母GS115表达蛋白条带大小不对已有2人参与

各位虫友,本人用PPICZαA载体在毕赤酵母GS115中表达我的目的蛋白,转化筛选都正常,甲醇诱导后取上清跑胶发现有我的目的条带(48Kda)左右,但是同时还有一条大概80Kda 的条带,硫酸铵将目的蛋白沉淀后将用PBS溶解的沉淀和剩余的上清跑胶发现上清中确实无蛋白了,而溶解后的沉淀只有80Kda的那条带了。我的蛋白是被降解了吗?想知道那个80Kda的是什么东西,还有就是PPICZαA载体表达蛋白是不是会多一段载体自身序列?我看启动子后就是Met了,然后再是我们插入的目的基因
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boomshakalaka
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childchou

银虫 (小有名气)

大佬们,求助。。。。。
boomshakalaka
2楼2017-12-27 21:23:21
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wangrb10

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-26 07:53:04
如果你想知道那个80kd是什么蛋白去做个质谱就知道了,至于为什么48kd的蛋白没有了不好确定,有可能是被降解;这个质粒表达蛋白会有一个a-factor信号肽,理论上会被切除但是会存在不能完全切除的情况。
3楼2017-12-29 16:42:20
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

朋友您好,请问我可以与您交换一下菌株吗?我拿质粒,我最近着手毕赤酵母体系构建,目前只有质粒,宿主菌株没有,您可否实施点给我,或者我拿我有且对你有帮助的质粒进行交换呢?
付出定有回报
4楼2018-01-16 16:08:48
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微微皮蛋

新虫 (初入文坛)

楼主知道了是什么了吗,我现在也出现了

发自小木虫Android客户端
5楼2018-01-25 20:51:13
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zhxian

新虫 (小有名气)

楼主,可以和你换点你用的载体不?

发自小木虫Android客户端
6楼2018-12-28 01:00:51
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

7楼2018-12-28 08:27:06
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