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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 毕赤酵母GS115表达蛋白条带大小不对
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childchou

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母GS115表达蛋白条带大小不对 已有2人参与

各位虫友，本人用PPICZαA载体在毕赤酵母GS115中表达我的目的蛋白，转化筛选都正常，甲醇诱导后取上清跑胶发现有我的目的条带（48Kda）左右，但是同时还有一条大概80Kda 的条带，硫酸铵将目的蛋白沉淀后将用PBS溶解的沉淀和剩余的上清跑胶发现上清中确实无蛋白了，而溶解后的沉淀只有80Kda的那条带了。我的蛋白是被降解了吗？想知道那个80Kda的是什么东西，还有就是PPICZαA载体表达蛋白是不是会多一段载体自身序列？我看启动子后就是Met了，然后再是我们插入的目的基因
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boomshakalaka
1楼 2017-12-27 11:02:38
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wangrb10

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-26 07:53:04
如果你想知道那个80kd是什么蛋白去做个质谱就知道了，至于为什么48kd的蛋白没有了不好确定，有可能是被降解；这个质粒表达蛋白会有一个a-factor信号肽，理论上会被切除但是会存在不能完全切除的情况。
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3楼2017-12-29 16:42:20
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childchou

银虫 (小有名气)
大佬们，求助。。。。。
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boomshakalaka
2楼2017-12-27 21:23:21
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

朋友您好，请问我可以与您交换一下菌株吗？我拿质粒，我最近着手毕赤酵母体系构建，目前只有质粒，宿主菌株没有，您可否实施点给我，或者我拿我有且对你有帮助的质粒进行交换呢？
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付出定有回报
4楼2018-01-16 16:08:48
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微微皮蛋

新虫 (初入文坛)
楼主知道了是什么了吗，我现在也出现了

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5楼2018-01-25 20:51:13
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