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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 反向筛选法进行同源重组，实验总不成功，求大神指点
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Long777768

新虫 (初入文坛)

[求助] 反向筛选法进行同源重组，实验总不成功，求大神指点

1、  将GALK基因电转到SW102，通过同源重组， GALK基因插入到SW102（这一步通过菌落ＰＣＲ验证，验证是阳性菌落进行保菌）；　　　　　　　　　　2、  将gp350基因电转到 已将GALK基因电转到SW102的菌株中，目的使gp350基因替换GALK基因，但是电转后涂板，总是没有菌落生长，且实验后之前保菌的GALK基因电转到SW102菌株经菌落PCR鉴定，也鉴定不出 GALK基因 电转到SW102阳性菌株  

实验急，求大神指点@biostar2009
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1楼 2017-12-22 11:40:53
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匿名

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2楼2020-07-27 21:43:52
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zengxin1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 感觉走 at 2020-07-27 21:43:52
您好，请问楼主问题解决了吗，我现在做galk负筛选时，长出来很多单菌落，但PCR鉴定并不是重组成功的基因，请教楼主最后是如何解决的?

您好，请问问题解决了吗

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3楼2021-02-25 17:03:18
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