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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助，PEI转染悬浮细胞不成功，求帮助
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助，PEI转染悬浮细胞不成功，求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml，接种在125ml摇瓶中，总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染，DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后，复合，静置10min后，加入到摇瓶中
转染48h后观察，没有荧光，一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
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1楼 2017-11-07 09:29:20
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？
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2楼2017-11-07 17:09:53
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？

我用贴壁细胞做了对照，转染的很好，说明质粒与pei没有问题，我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后，补加10ml，依旧没有荧光，，，，
文献中也是用的freestyle expression ，不知道问题出在了哪里
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3楼2017-11-07 17:17:22
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沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以用这个CycloFect转染剂试试，这种转染剂的成功率高，而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。
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Everymanshouldbehaveasagentleman.
4楼2017-11-07 18:28:27
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用PEI转染过293细胞，转染效率很高的，，但是我转染的细胞很少，只有10的六次方的样子，我当时是把细胞收集然后离心去上清加入总体积为300ul的无血清培养基和PEI复合物，置于EP管里培养箱静置4-6h后补液1.5ml完全培养基，转移到EP管里，效率还不错，不知道你那边适用不
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5楼2017-11-08 09:16:00
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 沧浪剑客 at 2017-11-07 18:28:27
你可以用这个CycloFect转染剂试试，这种转染剂的成功率高，而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。

那个好贵的，，，，主要是我这个不是转染效率不高，是压根没转染上，，，有什么建议吗
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6楼2017-11-08 09:25:31
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沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我叫崔温柔 at 2017-11-08 09:25:31
那个好贵的，，，，主要是我这个不是转染效率不高，是压根没转染上，，，有什么建议吗...

我问了个教授，人家说你选用的质粒的promotor对吗？
转染剂也可以对比一下，结果不同的。
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Everymanshouldbehaveasagentleman.
7楼2017-11-09 09:31:26
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 沧浪剑客 at 2017-11-09 09:31:26
我问了个教授，人家说你选用的质粒的promotor对吗？
转染剂也可以对比一下，结果不同的。...

应该没问题……因为悬浮的293是从贴壁的293驯化的，我做贴壁的转染没有问题我昨天尝试了一下在35mmdish里面转染4h，然后接在摇瓶里，有一丢丢光

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8楼2017-11-09 09:46:01
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)
哇，在这里发现你了！
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9楼2017-11-09 17:32:46
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稻草人2011

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 我叫崔温柔 at 2017-11-09 09:46:01
应该没问题……因为悬浮的293是从贴壁的293驯化的，我做贴壁的转染没有问题我昨天尝试了一下在35mmdish里面转染4h，然后接在摇瓶里，有一丢丢光
...

请问楼主，您的转染的问题解决了吗？我遇到了跟您类似的问题
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10楼2018-10-31 09:15:35
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