24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4611)
>休闲灌水 (479)
>虫友互识 (388)
>导师招生 (343)
>文献求助 (331)
>论文投稿 (188)
>博后之家 (174)
>招聘信息布告栏 (134)
>硕博家园 (67)
>学术会议 (65)
>考博 (59)
>找工作 (45)
>基金申请 (40)
>教师之家 (34)
>育儿交流 (33)
>有机交流 (30)

返回列表

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 94.1
散金: 20
红花: 3
帖子: 317
在线: 76.4小时
虫号: 4240157
注册: 2015-11-23
专业: 生物化学

[求助] 求助，PEI转染悬浮细胞不成功，求帮助已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml，接种在125ml摇瓶中，总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染，DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后，复合，静置10min后，加入到摇瓶中
转染48h后观察，没有荧光，一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议

回复此楼

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有208人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

1楼 2017-11-07 09:29:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ywwabc

新虫 (小有名气)

应助: 49 (小学生)
金币: 500.1
红花: 11
帖子: 260
在线: 58.3小时
虫号: 6964218
注册: 2017-07-18
专业: 细胞增殖、生长与分化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？

赞一下

回复此楼

2楼2017-11-07 17:09:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 94.1
散金: 20
红花: 3
帖子: 317
在线: 76.4小时
虫号: 4240157
注册: 2015-11-23
专业: 生物化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染，但是我估计的是你可以先把细胞密度调大，上清少一些转染4-6h后再补液，这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊！还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢？之前有转染成功过吗？

我用贴壁细胞做了对照，转染的很好，说明质粒与pei没有问题，我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后，补加10ml，依旧没有荧光，，，，
文献中也是用的freestyle expression ，不知道问题出在了哪里

赞一下

回复此楼

3楼2017-11-07 17:17:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖