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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助,PEI转染悬浮细胞不成功,求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml,接种在125ml摇瓶中,总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染,DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后,复合,静置10min后,加入到摇瓶中
转染48h后观察,没有荧光,一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?

我用贴壁细胞做了对照,转染的很好,说明质粒与pei没有问题,我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后,补加10ml,依旧没有荧光,,,,
文献中也是用的freestyle expression ,不知道问题出在了哪里
3楼2017-11-07 17:17:22
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我叫崔温柔

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4楼: Originally posted by 沧浪剑客 at 2017-11-07 18:28:27
你可以用这个CycloFect转染剂试试,这种转染剂的成功率高,而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。

那个好贵的,,,,主要是我这个不是转染效率不高,是压根没转染上,,,有什么建议吗
6楼2017-11-08 09:25:31
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7楼: Originally posted by 沧浪剑客 at 2017-11-09 09:31:26
我问了个教授,人家说你选用的质粒的promotor对吗?
转染剂也可以对比一下,结果不同的。...

应该没问题……因为悬浮的293是从贴壁的293驯化的,我做贴壁的转染没有问题我昨天尝试了一下在35mmdish里面转染4h,然后接在摇瓶里,有一丢丢光

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-11-09 09:46:01
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我叫崔温柔

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10楼: Originally posted by 稻草人2011 at 2018-10-31 09:15:35
请问楼主,您的转染的问题解决了吗?我遇到了跟您类似的问题...

没解决啊 ,因为没解决都辞职了
11楼2018-11-02 15:52:39
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