24小时热门版块排行榜    

查看: 3889  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助,PEI转染悬浮细胞不成功,求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml,接种在125ml摇瓶中,总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染,DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后,复合,静置10min后,加入到摇瓶中
转染48h后观察,没有荧光,一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻草人2011

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我叫崔温柔 at 2017-11-09 09:46:01
应该没问题……因为悬浮的293是从贴壁的293驯化的,我做贴壁的转染没有问题我昨天尝试了一下在35mmdish里面转染4h,然后接在摇瓶里,有一丢丢光
...

请问楼主,您的转染的问题解决了吗?我遇到了跟您类似的问题
10楼2018-10-31 09:15:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?
2楼2017-11-07 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?

我用贴壁细胞做了对照,转染的很好,说明质粒与pei没有问题,我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后,补加10ml,依旧没有荧光,,,,
文献中也是用的freestyle expression ,不知道问题出在了哪里
3楼2017-11-07 17:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以用这个CycloFect转染剂试试,这种转染剂的成功率高,而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。
Everymanshouldbehaveasagentleman.
4楼2017-11-07 18:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +7 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 7/350 2026-08-13 15:15 by sELn1rusD174
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见