24小时热门版块排行榜    

查看: 3885  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助,PEI转染悬浮细胞不成功,求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml,接种在125ml摇瓶中,总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染,DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后,复合,静置10min后,加入到摇瓶中
转染48h后观察,没有荧光,一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?

我用贴壁细胞做了对照,转染的很好,说明质粒与pei没有问题,我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后,补加10ml,依旧没有荧光,,,,
文献中也是用的freestyle expression ,不知道问题出在了哪里
3楼2017-11-07 17:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?
2楼2017-11-07 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以用这个CycloFect转染剂试试,这种转染剂的成功率高,而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。
Everymanshouldbehaveasagentleman.
4楼2017-11-07 18:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用PEI转染过293细胞,转染效率很高的,,但是我转染的细胞很少,只有10的六次方的样子,我当时是把细胞收集然后离心去上清加入总体积为300ul的无血清培养基和PEI复合物,置于EP管里培养箱静置4-6h后补液1.5ml完全培养基,转移到EP管里,效率还不错,不知道你那边适用不
5楼2017-11-08 09:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见