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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

[求助] 求助,PEI转染悬浮细胞不成功,求帮助 已有3人参与

我用PEI转染悬浮293细胞
培养基用freestyle
转染前一天细胞计数1*10e6cells/ml,接种在125ml摇瓶中,总体积20ml
转染当天细胞密度为2*10e6cells/ml时转染,DNA、PEI分别用freestyle培养基稀释后,复合,静置10min后,加入到摇瓶中
转染48h后观察,没有荧光,一点儿都没有
希望有悬浮转染经验的虫友提供宝贵意见及建议
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我叫崔温柔

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-11-07 17:09:53
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?

我用贴壁细胞做了对照,转染的很好,说明质粒与pei没有问题,我先加2.5*10e6cells/ml,10ml转染24个小时后,补加10ml,依旧没有荧光,,,,
文献中也是用的freestyle expression ,不知道问题出在了哪里
3楼2017-11-07 17:17:22
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我没有使用过摇瓶转染,但是我估计的是你可以先把细胞密度调大,上清少一些转染4-6h后再补液,这样可以增大复合物与细胞接触的概率的啊!还有可能会不会是你的质粒本身不好表达呢?之前有转染成功过吗?
2楼2017-11-07 17:09:53
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沧浪剑客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以用这个CycloFect转染剂试试,这种转染剂的成功率高,而且毒性可以说当前这一代产品里最低的。
Everymanshouldbehaveasagentleman.
4楼2017-11-07 18:28:27
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用PEI转染过293细胞,转染效率很高的,,但是我转染的细胞很少,只有10的六次方的样子,我当时是把细胞收集然后离心去上清加入总体积为300ul的无血清培养基和PEI复合物,置于EP管里培养箱静置4-6h后补液1.5ml完全培养基,转移到EP管里,效率还不错,不知道你那边适用不
5楼2017-11-08 09:16:00
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